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目的： 通过设计合成抗菌肽SMAP-29新基因，构建其原核表达载体pGEX-4T-1／SMAP-29，经诱导表达和分离纯化，得到大量具有抗菌活性的抗菌肽SMAP-29。 方法： 根据SMAP-29蛋白质氨基酸序列，选用大肠杆菌偏爱密码子，同时兼顾了其mRNA二级结构自由能自行设计全新基因，基因采用geneSOEing(gene splicing by overlap extension，geneSOEing)法合成，合成的基因克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中，通过酶切分析、PCR和测序鉴定筛选出阳性重组质粒；重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达，经GST琼脂糖FF层析柱纯化，同时作凝血酶切割，再经HPLC分离纯化，获得纯度达95％的目的蛋白。检测抗菌肽SMAP—29的抗菌活性，采用微量肉汤稀释法测定其对白色葡萄球菌(临床株)、粪肠球菌耐药株(耐氟喹诺酮类)、粪肠球菌标准株(ATCC29212)和大肠杆菌(JM 109)的MIC和MBC值。 结果： 经geneSOEing法合成的全新基因长109bp(含限制性酶切位点)，将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中，通过酶切分析、PCR和测序鉴定，其序列与所设计序列完全一致。SDS—PAGE电泳结果分析表明pGEX-4T-1／SMAP-29可以在BL21中表达大小约29KD的GST-SMAP-29融合蛋白，经凝血酶切割和分离纯化后得到大小约3.2KDa的SMAP-29目的多肽。微量肉汤稀释法检测表明SMAP-29具有较强的抗菌活性。