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猪苓（Polyporus umbellatus）是具有2000多年药用历史的名贵珍稀药用真菌,菌核是其主要的药用部位。多糖是猪苓菌核的主要活性成分之一,具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、护肝等多种重要的生理活性,但在活性功能中扮演重要角色的结构性质却少有报道。本论文对猪苓菌核多糖进行了系统性的研究,包括菌核多糖的提取工艺优化;活性均一多糖组分的分离纯化制备;活性均一组分的理化特性分析、结构鉴定和溶液构象性质研究。1.猪苓菌核多糖的提取工艺优化研究猪苓菌核多糖超声辅助提取工艺在单因素的基础上采用Box-Behnken设计进行响应面优化。结果表明除了超声功率、提取温度、提取时间和液料比的明显的单独影响作用之外,提取温度与超声功率和液料比,液料比与超声功率和提取时间之间的交互作用对猪苓菌核多糖得率也有显著的影响。提取工艺参数的最优设置为温度72.3oC,功率304.2 W,液料比22.7 m L/g和提取时间63.6 min,此条件下得到的最大得率为2.48%。2.猪苓菌核多糖的分离纯化和理化特性研究猪苓菌核多糖提取液依次使用30、60、80 vol.%的乙醇终浓度分级沉淀,分别得到3个粗组分PUPF30、PUPF60和PUPF80。考虑到水溶性和抗氧化活性结果,最终选取PUPF60和PUPF80进一步纯化制备均一活性多糖组分。经DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S系列凝胶柱层析后,分别从PUPF60和PUPF80中得到PUPF60W、PUPF60S1、PUPF60S2以及PUPF80W、PUPF80S1、PUPF80S2六个均一组分,平均分子量分别为2.09×104 Da、2.27×104 Da、2.44×104Da、6.5×103 Da、8.8×103 Da、6.0×103 Da。6个组分中除PUPF80S2含有8%以上的蛋白之外均只含少量蛋白,且均具有多糖的特征红外吸收。糖醛酸存在于盐洗脱组分PUPF60S1、PUPF60S2、PUPF80S1和PUPF80S2中,含量分别为3.75%、24.20%、10.02%和14.23%。3.猪苓菌核均一多糖组分的结构鉴定6个猪苓菌核均一多糖组分的结构性质采用单糖组成分析、甲基化分析、羧基还原等化学方法,结合气相、气质联用以及1D和2D NMR等仪器分析技术进行阐述,确定了包括它们的单糖组成、糖残基链接类型和顺序、异头构型等结构信息。（1）PUPF60W的结构性质PUPF60W是支链度为74.7%的高度支链化多糖,主要由岩藻糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为0.82:1.00:12.25;主要的结构构成为主链由α-1,6-D-Galp组成,非还原性末端α-D-Galp取代了大约2/3的主链残基的O-2位,具体结构如下:另外结构中也含有少量末端α-L-Fucp、α-1,2,3-D-Galp、α-1,3-D-Glcp等残基。（2）PUPF60S1的结构性质PUPF60S1为支链度为41.2%的多糖,主要由葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为2.02:1.00,同时也含有极少量的葡萄糖醛酸和岩藻糖;主链由α-1,6-D-Galp、α-1,4-D-Glcp、β-1,6-D-Glcp、β-1,3-D-Glcp构成,其中部分α-1,6-D-Galp的O-2位链接有非还原性末端α-D-Galp,部分β-1,6-D-Glcp的O-3位链接有末端β-D-Glcp、β-1,4-D-Glcp、β-1,3-D-Glcp构成的支链,具体的结构可能如下:其中,x、y、m、n近似比值为11:5:2:8。另外,少量末端α-L-Fucp、α-1,2,3-D-Galp、α-1,4,6-D-Glcp等残基可能也存在于主链或支链中。（3）PUPF60S2的结构性质PUPF60S2是支链度为37.1%的多糖,主要由葡萄糖和葡萄糖醛酸构成;主链由β-1,6-D-Glcp构成且每隔1个即被支链取代于O-3位,支链由末端β-D-Glcp、β-1,4-D-Glcp、β-1,3-D-Glcp、β-1,4-D-Glcp A、β-1,3-D-Glcp A构成,具体结构如下:其中,少量的β-1,4-D-Glcp A和β-1,3-D-Glcp分别被它们的对应物β-1,4-D-Glcp和β-1,3-D-Glcp A替代。（4）PUPF80W的结构性质PUPF80W主要由摩尔比为2.07:1.00的葡萄糖和半乳糖组成,但支链度仅为28.5%;主链由α-1,6-D-Galp、α-1,4-D-Glcp、β-1,6-D-Glcp、β-1,3-D-Glcp构成,其中部分α-1,6-D-Galp的O-2位链接有非还原性末端α-D-Galp,部分β-1,6-D-Glcp的O-3位链接有末端β-D-Glcp、β-1,3-D-Glcp、α-1,3-D-Glcp构成的支链,具体的结构可能如下:其中,x、y、z、l、m、n的近似比例为6:3:7:2:10:6。同时结构中可能还含有少量1,2,3-D-Galp和β-1,4-D-Glcp。（5）PUPF80S1的结构性质PUPF80S1主要由葡萄糖和葡萄糖醛酸构成,但支链度更低（22.8%）;主链除主要由β-1,6-D-Glcp构成之外还含有少量β-1,3-D-Glcp,部分β-1,6-D-Glcp的O-3位被支链取代,支链主要由末端β-D-Glcp、β-1,4-D-Glcp、β-1,3-D-Glcp构成。糖醛酸构成为β-1,4-D-Glcp A和β-1,3-D-Glcp A两种残基,分别部分替代结构中β-1,4-D-Glcp和β-1,3-D-Glcp两种残基。PUPF80S1的具体结构如下:其中,部分β-1,4-D-Glcp和β-1,3-D-Glcp分别被对应的β-1,4-D-Glcp A和β-1,3-D-Glcp A所替代。（6）PUPF80S2结构性质PUPF80S2的支链度为25.7%,主要单糖单元为葡萄糖、葡萄糖醛酸和半乳糖,主要的残基为末端D-Glcp、1,3-D-Glcp、1,4-D-Glcp、1,4-D-Glcp A、1,6-D-Glcp、1,3,6-D-Glcp等,进一步的结构性质需待后续制备足够量后进行NMR分析确定。4.猪苓菌核均一多糖的溶液中构象研究多检测器凝胶渗透色谱仪和原子力显微镜被用于PUPF60W、PUPF60S1、PUPF60S2、PUPF80W和PUPF80S1在溶液中的构象进行分析。结果表明溶液中PUPF60W、PUPF60S1、PUPF80W和PUPF80S1的构象为球形链,链密度分别为0.44、0.28、0.43和0.38g/m L;PUPF60S2的构象为柔顺链,每单位轮廓长度的分子摩尔质量、持续长度、链直径分别为408 nm-1、1.58 nm和0.76 nm。