液态奶中阪崎肠杆菌污染状况的研究

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近年来,世界范围内食品安全事件高发。越来越多的人开始关注食品安全问题。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、菌血症、小肠结肠炎,并可能引起神经功能紊乱,造成严重的后遗症,死亡率高达20%~50%以上,引起世界范围内的广泛关注。通过研究发现传统方法操作繁琐,检测时间长,且灵敏度较低。本研究利用显色培养基建立了一套从液态奶中快速检出阪崎肠杆菌的方法,缩短了阪崎肠杆菌的检测时间1~2d,减少了检测成本,灵敏度可达100%。对阪崎肠杆菌的培养特征、生化反应、等生物学性状与标准株进行了比较研究。本试验选用雌性昆明种小鼠,清洁级,体重18~22 g,分为6组,每组10只,对阪崎肠杆菌的毒力与标准菌株行了比较研究。以阪崎肠杆菌的16S rRNA基因为靶基因,选择特异性引物,进行PCR扩增,检测液态奶中阪崎肠杆菌。其PCR适宜反应体系为:6μL 10×PCR buffer,4μL dNTPs混合物,2.5 Mg2+μL(25mM),2μL 10μmol正向引物,2μL 10μmol反向引物,0.25μL(5U/μL) Taq,23.25μL水,总反应体系为50μL;其适宜的PCR扩增程序为:PCR反应采用冷启动,95℃预变性5 min;变性95℃1 min~退火6l℃0.5 min进行35个循环。PCR反应产物在2%的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果。采用改进方法可以缩短阪崎肠杆菌的检测时间,提高了灵敏度。从167份的样品中检出阪崎肠杆菌4株,检出率为2.39%。采用传统方法从167份的样品中检出阪崎肠杆菌3株,检出率为1.79%。其中120份巴氏杀菌乳中检出3株阪崎肠杆菌检出率为2.5%,47份灭菌乳中有1株阪岐肠杆菌检出,检出率为2.1%。
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