【摘 要】
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传统中药(TCM)药效物质基础研究在中药的药理活性研究、中药质量控制、中药开发应用等环节发挥着重要作用。近年来,以代谢物质群为目标的研究用于阐明中药药效物质基础逐渐成
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传统中药(TCM)药效物质基础研究在中药的药理活性研究、中药质量控制、中药开发应用等环节发挥着重要作用。近年来,以代谢物质群为目标的研究用于阐明中药药效物质基础逐渐成为研究热点。但是由于中药代谢物群组数量庞杂,结构相似,一些代谢物含量非常低(在ng以下),并且生物样品中存在的复杂的基质造成了非常严重的信号干扰,给中药代谢产物群的研究带来了非常大的困难,使得中药药理活性研究面临非常大的挑战。在此背景下,中药生物样品前处理新技术和新方法研究成为中药药效物质基础研究非常具有挑战性的热点,这一关键环节的突破,将有力改善微痕量中药代谢产物研究难题。本文基于磁性分子印记聚合物,建立了以分散固相萃取技术(MMIPs-DSPE)为基础,结合高灵敏度的LTQ-Orbitrap-MS的新型分析系统,并成功应用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢产物的分离富集以及检测。本实验以Fe3O4@SiO2为磁性载体,氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)为功能单体,正硅酸四乙酯(TEOS)为交联剂,人参皂苷Rb1为模板分子,成功合成并优化了了人参皂苷Rb1磁性分子印迹聚合物(Rb1-MMIPs),该聚合物磁响应高(10.8 emu/g),动力学性能良好,并且对人参皂苷Rb1显示出比较高的吸附容量(636 μmol/g)和较强的选择性。本实验设计以Fe3O4@SiO2磁性分子印记聚合物为基础的分散固相萃取技术与LTQ-orbitrap-MS技术联合用于大鼠粪便中三七总皂苷(PNS)代谢产物的研究,并与两种传统的预处理方法有机溶剂提取(OSE)和固相萃取法(SPE)就分离富集效果和基质效应进行比较。结果表明,该方法成功实现了对大鼠粪便中PNS代谢产物群的特异性识别与分离富集,在20分钟内共检测出58个结构相关化合物(包括26个原人参二醇类(PPD)化合物以及32个原人参三醇类(PPT)化合物),明显多于采用传统OSE和SPE预处理方法所检测出的化合物数量(分别为34和30个)。同时,MMIPs-DSPE预处理方法基质效应为(0.98~14.84%),显著低于OSE和SPE(8.60~67.13%,1.43~22.25%)。
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