低氧预处理人牙髓干细胞对HIBD新生大鼠脑神经元自噬及ATG-7的影响

来源 :潍坊医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:elfer_hfut
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:观察不同氧浓度对人牙髓干细胞(h DPSCs)增殖及神经分化的影响,选择最佳的低氧浓度预处理h DPSCs,并探讨低氧条件下预处理h DPSCs脑内移植,对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑神经元自噬及自噬相关蛋白-7(ATG-7)的影响,为h DPSCs的临床应用提供理论依据。方法:健康7日龄Sprague-Dawley新生大鼠48只,随机分为假手术组(Sham组)、缺氧缺血性脑损伤组(HIBD组)、常氧预处理h DPSCs组(N-h DPSCs组)及低氧预处理h DPSCs组(H-h DPSCs组),各组根据移植后时间,分为移植后24 h及4 d两个亚组,n=6。无菌收集正畸减数牙或者第三磨牙,改良组织块联合酶消化法分离培养h DPSCs,细胞化学免疫荧光染色法检测细胞表面标记物CD34、CD90、CD146。选用1%、5%、10%及21%四个氧浓度预处理h DPSCs。Ed U细胞化学免疫荧光染色法检测细胞增殖,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL细胞化学免疫荧光染色法检测细胞凋亡,采用显微镜观察h DPSCs神经诱导后的形态学变化,细胞化学免疫荧光染色法检测h DPSCs神经诱导后细胞巢蛋白(Nestin)的表达,通过上述方法,确立最佳h DPSCs低氧预处理浓度。采用经典Rice-Vannuis法制备新生大鼠HIBD模型,造模后24 h,经侧脑室移植N-h DPSCs与H-h DPSCs。移植后24 h,Neu N/P62、Neu N/LC3-II、Neu N/Beclin-1、Neu N/ATG-7免疫荧光双标法检测低氧预处理h DPSCs对HIBD新生大鼠损伤侧大脑皮层神经元自噬及ATG-7的影响;移植后4 d,苏木素-伊红(HE)染色法观察h DPSCs治疗对HIBD新生大鼠损伤侧大脑皮层组织病理学的影响;尼氏染色法观察h DPSCs治疗后HIBD新生大鼠损伤侧大脑皮层神经细胞数的变化。结果:(1)成功分离培养h DPSCs,细胞化学免疫荧光染色鉴定结果示,h DPSCs间充质细胞标志物CD90+、CD146+,造血干细胞表面标志物CD34-。(2)Ed U细胞化学免疫荧光染色结果示,体外培养6 h、12 h时,不同氧浓度之间h DPSCs增殖率无显著差异(P>0.05);体外培养24 h,5%O2条件下h DPSCs增殖率显著高于21%O2,1%O2和10%O2条件下h DPSCs增殖率亦显著高于21%O2,但低于5%O2(P均<0.05);培养72 h,5%O2条件下h DPSCs增殖率仍高于其他氧浓度(P<0.05)。(3)CCK-8结果示,培养24 h,5%O2、10%O2和21%O2条件下细胞OD值均显著高于1%O2,且5%O2细胞OD值显著高于21%O2(P均<0.05),10%O2和21%O2条件下细胞OD值差别无统计学意义(P>0.05)。(4)TUNEL细胞化学免疫荧光染色结果示,培养24 h,1%O2、10%O2和21%O2条件下凋亡细胞数均显著高于5%O2,且1%O2条件下凋亡细胞数显著高于21%O2(P均<0.05),10%O2和21%O2条件下凋亡细胞数无统计学意义(P>0.05)。(5)神经诱导5 d,不同氧浓度条件下细胞形态均诱导为神经元样,1%O2、5%O2及10%O2细胞突起数量均显著高于21%O2(P均<0.05),且5%O2细胞突起数量显著高于1%O2和10%O2(P<0.05)。(6)Nestin细胞化学免疫荧光染色结果示,神经诱导5 d,1%O2、5%O2、10%O2条件下FINestin显著高于21%O2,5%O2FINestin显著强于1%O2和10%O2,且10%O2FINestin显著强于1%O2(P均<0.05)。5%O2为h DPSCs最佳的氧诱导浓度。(7)h DPSCs侧脑室移植后24 h,H-h DPSCs组与N-h DPSCs组大鼠脑内大脑皮层神经元Beclin-1+、LC3-II+及ATG-7+细胞数显著低于HIBD组,且H-h DPSCs组显著低于N-h DPSCs组(P均<0.05),H-h DPSCs组与N-h DPSCs组大鼠脑内大脑皮层神经元P62+细胞数均显著高于HIBD组(P<0.05),且H-h DPSCs组显著高于N-h DPSCs组(P<0.05)。(8)HE染色结果示,HIBD组损伤侧大脑皮层神经细胞形态紊乱,排列无规律,N-h DPSCs组和H-h DPSCs组神经细胞排列较整齐,形态较规则,且H-h DPSCs组神经细胞排列较N-h DPSCs组更规则。(9)尼氏染色结果示,N-h DPSCs组和H-h DPSCs组损伤侧大脑皮层神经细胞数均较HIBD组显著增加,且H-h DPSCs组显著高于N-h DPSCs组(P<0.05)。结论:(1)低氧预处理可促进h DPSCs的增殖及其神经分化潜能,且5%O2条件下更易促进h DPSCs增殖及神经分化。(2)h DPSCs移植可减轻HIBD新生大鼠脑神经元自噬并抑制ATG-7的表达,进而减轻新生大鼠HIBD,发挥神经保护作用,其中,5%O2预处理h DPSCs移植的疗效优于常氧条件下培养的h DPSCs,更易减轻HIBD后大脑皮层神经元自噬,具有更好的神经保护作用。
其他文献
灰铸铁制动鼓是目前国内外载货汽车重要的组成部件之一。然而随着经济以及汽车工业的高速发展,使得现有的灰铸铁制动鼓面临严峻的挑战。当汽车进行紧急制动或频繁制动时,制动鼓内表面受到摩擦后温度可升高至500-700℃,产生较大的温度梯度及温差应力,最终造成了制动鼓的高温开裂,乃至断裂失效,降低了铸铁制动鼓的安全性和可靠性。因此铸铁制动鼓除了应具有较好的常温力学性能外,更应具有较高的高温力学性能及抗热疲劳性
学位
液压缸的内泄漏是难以避免的液压系统故障,此故障会严重影响液压系统的工作效率。因此,对于液压缸内泄漏的数据进行准确识别和预测就非常重要了。本文提出建立一种模拟液压缸微小内泄漏的模型,将液压油的泄漏量通过高精度应变片转化为应变信号,并将采集到的应变信号利用各类神经网络进行训练,形成计算模型,并通过该模型得到预测结果。文中应用到的神经网络有卷积神经网络、BP神经网络、T-S神经网络和Elman神经网络,
学位
研究背景在表观遗传学领域,RNA化学修饰成为继DNA修饰和组蛋白甲基化之后的又一研究热点。RNA修饰是一种转录后水平的调控方式,目前已鉴定到一百多种RNA修饰,它们广泛分布于各类RNA上,与RNA功能联系密切。其中甲基化修饰是RNA修饰的主要形式,约占RNA修饰总量的三分之二。研究发现,RNA甲基化修饰在哺乳动物脑中含量丰富,参与神经系统发育,且有着独特的甲基化模式和功能。到目前为止,真核生物RN
学位
当前,“碳达峰、碳中和”已成为国家发展战略目标,加快研发和使用新能源汽车是落实该目标的重要举措。电动公交是新能源汽车的重要类型,在城市公共交通系统中推广使用,可有效降低市政路网中燃油机车占比,达到减少尾气污染和节能减碳的要求。然而,电动公交入网充电时刻和功率大小具有随机性,大规模电动公交无序充电不仅对电网安全经济运行和电能质量产生影响,还将造成公交运营支付的充电成本过高。电动公交动力电池与普通储能
学位
时间是现实世界中普遍存在的重要概念,在临床领域中,时间信息描述了就诊、医疗检查、用药等事件的发生及状态变化。关于时间的知识表示及实体识别对辅助临床决策具有重要意义。在现有医疗信息系统中,时间的结构化表示通常基于精确时刻或时间段,忽视了电子病历中具有模糊性、不规律性等特性的复杂时间。此外,现有的时间实体识别也是面向精确时刻或时间段的,对于复杂时间的识别准确率较低。基于上述问题分析,本文针对临床医疗领
学位
目前,越来越多的耐火材料研究者聚焦于绿色环保,开发减污降碳、环境友好、生态化、可循环利用的耐火材料,因此耐火材料的回收再利用及工业固废资源化技术已成为耐火材料科技创新和研究的热点。铝铬渣是基于铝热还原法冶炼单质铬过程中伴生的固体废弃物,对这种固体废弃物的预处理和利用已经引起国内外材料科研工作者以及环保工作者的重视。由铝铬渣为原料制备的再生铝铬质耐火材料有着优异的力学性能和高温性能,同时其优良的抗渣
学位
目的:本课题组前期通过蛋白多肽组学从华蟾素注射液中鉴定出120余条多肽,结合镇痛动物模型的行为学观察,筛选得到具有镇痛活性的多肽CI5,但CI5的安全性分析、具体的镇痛程度以及镇痛机制未进行探究。本研究重点关注多方面验证CI5的镇痛活性及安全性并探讨其镇痛机制。方法:(1)CI5的鉴定及安全性分析:采用质谱法检测多肽CI5的实际分子量,通过高效液相色谱法对多肽CI5进行纯度鉴定。采用溶血实验、细胞
学位
生物炭是一种由生物质热解制备的多孔炭材料,在能源、废水处理、农业生产、电极材料等领域得到了广泛应用。因此,生物炭的制备逐渐成为研究热点。碱金属是生物炭生成的关键影响因素,然而目前研究大多集中在热解过程中碱金属的迁移和转化行为,缺乏碱金属对生物炭生成影响的系统研究。本文以核桃壳为研究对象,探讨添加KCl对生物炭产率和物化性质的影响,将其与自由基反应机制相关联,揭示生物炭生成过程中KCl的作用机理。同
学位
目的:检测脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理的牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)(LPS-pre PDLSCs)来源的外泌体(Exosomes,Exo)(LPS-pre Exo)和正常的PDLSCs来源的外泌体的生物学特性及对THP-1巨噬细胞极化的影响。我们通过研究PDLSCs外泌体调节巨噬细胞的功能找到其治疗牙
学位
传统机器视觉系统体积庞大、成本较高而且升级维护困难,限制传统机器视觉系统的广泛应用。为了完成多种应用场景下的图像采集、高层次图像处理、高速输出,本文设计一款基于多核异构平台的嵌入式视觉系统。选用ARM+FPGA异构多核的ZYNQ处理平台,基于软硬协同设计思想完成算法程序设计。该视觉系统具有体积小、功耗低、实时性高、易于升级维护的优点。并且可以根据不同的应用场景,集成特定的功能算法,拓展其应用功能。
学位