牦牛钙激活中性蛋白酶大亚基基因cDNA的克隆与测序分析 钙激活中性蛋白酶基因(CAPNI与CAPN2)为近年刚被克隆的新基因(包括人、奶牛、绵羊以及小鼠等的相关基因)，它们是对肉的嫩度有影响的潜在的候选基因，该基因产物钙激活中性蛋白酶(μ-calpain与m-calpain)在肉的嫩化过程中发挥重要作用，对肉的嫩度有潜在的影响。本研究从牦牛肌肉组织中提取总RNA，利用RT-PCR技术制备牦牛肌肉组织cDNA。根据GeneBank已发表奶牛、猪与人的CAPNI基因cDNA序列设计巢式PCR引物，从牦牛肌肉组织cDNA中克隆出了部分目的cDNA序列，然后将目的序列与PGEM-T-easy载体连接，转化DH5α感受态菌株，挑取阳性克隆后提取质粒进行酶切鉴定与测序分析。首次克隆出牦牛的部分CAPN1基因(224bp)以及CAPN2基因(378bp)，并且将这两段cDNA序列与其它种属动物的相应部分cDNA序列进行了同源性比对。牦牛CAPN1基因中间部分cDNA序列与奶牛、人、Macaca、小鼠、绵羊以及大鼠相应部分cDNA序列的同源性分别为：98％、89％、89％、83％、96％、81％。牦牛CAPN2基因中间部分cDNA序列与绵羊、兔子、人、Macaca、小鼠相应部分cDNA序列的同源性分别为：98％、92％、91％、90％、88％。该部分cDNA序列在不同物种之间具有较强的保守性。牦牛钙激活中性蛋白酶基因(CAPNI与CAPN2)cDNA部分序列的克隆对以后进行牦牛CAPN1与CAPN2基因全长cDNA的克隆以及牦牛CAPN1与CAPN2基因组DNA的克隆奠定了基础。