花烛离体培养与快速繁殖技术研究

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虽然国内外花烛离体培养取得了巨大进展,但尚存在不足:如尚未归纳出完善、实用的离体培养操作程序;生产周期长;对各种生长调节剂的应用看法不一致;生产成本高昂;继代过程中细菌污染的困扰等问题严重制约着花烛离体培养技术的发展。本研究旨在进一步探索花烛离体培养的快捷途径、降低生产成本、减少污染的技术,为建立完善、实用的离体培养操作程序提供依据。本研究以花烛(Anthurium andraoanum)材料A1为试验对象,研究了无菌培养体系的建立、愈伤组织的增殖培养及不定芽的诱导培养、壮苗生根培养、试管苗移栽、低成本快速繁殖等技术。研究外植体、基本培养基类型、接种前灭菌处理方法、叶片生理部位、植物生长调节剂、光照条件等因素对愈伤组织诱导的影响,结果表明:叶片的诱导率最高,污染率最低;诱导愈伤组织发生率及发生速度依次为:1/2MS培养基>MS>N6>B5>white,幼叶>中龄叶>老叶,近轴端>远轴端,不含叶缘叶片>含叶缘叶片;经HgCl2灭菌处理的材料污染率较低,生长势最强。愈伤组织在1/2MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.2 mg/L中长势最好;在1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA0.1 mg/L中生长旺盛,不定芽健壮,可进一步生根培养;全面光照不利于愈伤组织形成,12小时光照下愈伤组织发生率最高;6mg/L庆大霉素对花烛试管苗细菌处理效果最好。研究继代次数、基本培养基、生长调节剂等对愈伤组织的增殖培养及不定芽的诱导培养的影响,结果表明:前五次继代培养愈伤组织产生芽的能力较强,不定芽质量较好;6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L诱导不定芽的分化率较高,生长健壮;MS是该阶段最优培养基。研究植物生长调节剂、基本培养基、蔗糖、活性炭对于生根培养的影响,结果表明:细胞分裂素和生长素在壮苗过程中缺一不可,6-BA0.3mg/L+NAA0.5mg/L对于壮苗过程最佳;生长素对于生根苗的生长是必需的;1/2MS培养基、2.0%的蔗糖、1/2MS+NAA0.3mg/L生根效果最佳。研究基质、温度、试管苗质量、季节对试管苗移栽的影响,结果表明:花烛苗在泥炭中生长好,成活率较高;壮苗移栽30d后成活率90%,弱苗只有55%,后来又有陆续死亡现象;3个月后,两种无菌苗株高和最大叶宽差异显著.简单设施条件下,4-9月份炼苗成活率最高,达到86%以上;1-3月、10-12月炼苗成活率较低。研究充分利用自然光、刻伤处理、不同碳源运用、瓶外生根法以及不定芽增殖与生根同步进行等对生产成本的影响,结果表明:晴天利用自然光,仅阴天照光处理电力消耗比正常情况下低20%;进行刻伤处理的切块产生愈伤组织块数及不定芽分化率明显高于正常切块;采用白砂糖30g、35g愈伤组织诱导、不定芽增殖效果较理想,比使用蔗糖30g节约资金90%左右。对在试管中生根稍差的无菌苗,用2号生根粉5000倍液浸30min处理新根点发生较多,生长势旺盛.
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