【摘 要】
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目的:探讨高糖高脂环境与NFKB1基因启动子区-94位点插入/缺失ATTG碱基(-94ins/delATTG)对人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及机制。方法:建立不同基因型原代HUVEC细胞的高糖高脂模型,利用Annexin-V-FLUOS染色检测细胞凋亡,利用MitoSOX染色检测线粒体活性氧生成,利用JC-1检测线粒体膜电位改变,利用钙黄绿素-AM检测线粒体mPTP开放,利用Mit
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目的:探讨高糖高脂环境与NFKB1基因启动子区-94位点插入/缺失ATTG碱基(-94ins/delATTG)对人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及机制。方法:建立不同基因型原代HUVEC细胞的高糖高脂模型,利用Annexin-V-FLUOS染色检测细胞凋亡,利用MitoSOX染色检测线粒体活性氧生成,利用JC-1检测线粒体膜电位改变,利用钙黄绿素-AM检测线粒体mPTP开放,利用MitoTracker染色通过激光共聚焦显微镜观察线粒体形态,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白CytC水平,线粒体分裂蛋白Drp1、Drp1-s616和Fis1线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2和Opa1水平,NF-κB信号转导通路中p50、p65蛋白水平以及eNOS和p-eNOS水平。结果:高糖高脂诱导原代HUVEC凋亡增加,与II型细胞相比,DD型细胞凋亡更多,活性氧增加,mPTP开放;线粒体过度分裂成碎片状,p50蛋白表达明显降低,DD型原代HUVEC的Drp1-s616磷酸化平增加,Mfn2蛋白表达降低,p-eNOS蛋白表达降低,胞浆CytC蛋白表达增加。结论:NFKB1基因启动子区-94ATTG缺失突变(DD基因型)在高糖高脂微环境中损伤较II型增加,是CAD发病的重要遗传易感因素,其作用机制可能与p50蛋白表达降低,从而下调促线粒体融合蛋白,上调促线粒体分裂蛋白,引起线粒体过度分裂,活性氧增加,内皮功能障碍,mPTP开放,线粒体CytC蛋白从线粒体释放到胞浆导致内皮细胞凋亡,从而启动动脉粥样硬化发生。
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