论文部分内容阅读
目的:研究PD1、Tim-3在危重症手足口病中的表达及对CD4、CD8T细胞分泌IFN-γ功能的影响,为研究危重症手足口病发病机制提供新思路。方法:采集于2017年3月到2017年10月在广西当地诊断手足口病57例患儿的外周血和详细病史资料,并按病情严重程度将57例患儿分为轻症18例、重症25例、危重症14例。同时收集10例年龄、性别相匹配的健康儿童的外周血作为正常对照。病例组中危重症及重症病例采集急性期咽拭子或肛拭子经逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR)进行病原检测(此部分由广西疾病预防控制中心完成);采用酶联免疫法对18例轻症病例及10例正常对照组儿童进行EV71、CoxA16病原学检测;采用流式细胞术检测并分析疾病各组患儿及正常对照组儿童外周血CD4、CD8T细胞表面表达PD1、Tim-3比例及胞内表达IFN-γ比例;体外予PD1、Tim-3中和性抗体阻断PD1、Tim-3途径,予PMA/离子霉素刺激阻断组与未阻断组之间CD4、CD8T细胞表达IFN-γ,流式细胞术检测阻断组与未阻断组CD4、CD8T细胞表达IFN-γ百分比。结果:57例患儿病原学结果,EV71-RNA阳性13例,Cox A16-RNA阳性4例,其他40例;危重症组EV71-RNA 8例,阳性率为72.7%(8/14)显著高于重症组4%(1/25)和轻症组22.22%(P﹤0.05);危重症HFMD患儿外周血CD4 T细胞表面表达的PD1为15.95±7.29%,明显高于重症、轻症组及正常组(均P<0.05),CD8 T细胞表面表达的PD1为18.96±6.84%,明显高于轻症组及正常组(均P<0.05),差异具有统计学意义;危重症HFMD患儿外周血CD4、CD8 T细胞表面表达的Tim-3分别为14.69±5.45%、19.24±6.48%,均明显高于重症、轻症组及正常对照(均P<0.05);重症HFMD患儿外周血CD4 T细胞表面表达的PD1高于正常组(P<0.05);危重症组PD1+Tim-3+CD4+T细胞、PD1+Tim-3+CD8T细胞的百分比分别为2.37±1.44%、5.28±3.63%均明显高于重症组及轻症组(均P<0.05),差异具有统计学意义;危重症组、重症组及轻症组CD4T细胞胞内表达干扰素分别为,5.64±3.96%、10.21±5.72%、6.89±5.25%,与正常对照组相比,均明显降低,其中危重症组降低更明显(均P<0.05),差异具有统计学意义;危重症组、重症组、轻症组CD8T细胞胞内表达干扰素分别为10.07±4.80%、29.96±11.45%、40.15±14.88%,危重症组及重症组较正常组均明显降低,危重症组较重症组降低更明显(均P<0.05),差异具有统计学意义;PD1阳性T细胞群中表达IFN-γ比例明显高于PD1阴性T细胞群(P<0.05),差异具有统计学意义;危重症组中,Tim-3阳性CD8T细胞群中表达IFN-γ比例显著低于Tim-3阴性CD8T细胞群(P<0.05),差异具有统计学意义。单一阻断Tim-3或联合阻断PD1、Tim-3途径后,危重症CD4、CD8T细胞胞内表达IFN-γ水平增加(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:1、HFMD患儿外周血CD4、CD8T细胞表面表达PD1、Tim-3比例显著上调,并且与疾病严重程度有关,危重症表达PD1、Tim-3比例最高;2、Tim-3负性调节CD4、CD8T细胞功能,单一阻断Tim-3信号或联合PD1、Tim-3阻断通路可以改善危重症患儿T细胞分泌IFN-γ功能;3、单一阻断PD1不能有效改善T细胞分泌IFN-γ功能,PD1对危重症HFMD T细胞功能障碍调节作用尚需进一步研究。