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背景:近年来,大量研究发现,能量代谢失衡,如高胆固醇血症,会严重影响人类的生殖系统。卵泡发育的过程中,由于卵泡的闭锁而导致大量生殖细胞被消耗掉。有研究表明,卵泡闭锁是由于颗粒细胞凋亡导致的。而颗粒细胞存在于卵泡发育的各个时期,其不但为卵母细胞提供营养,而且其参与卵子的发生以及卵子的成熟,从而颗粒细胞对卵泡的发育至关重要。多囊卵巢综合征是一种育龄期女性常见的一种内分泌及代谢紊乱所致的疾病,其具有多囊卵巢、高雄激素血症、胰岛素抵抗、无排卵、代谢异常等特征。随着能量代谢与生殖领域的研究进展发现,脂质代谢紊乱可严重影响人类的生殖系统,也进一步认识到卵子营养物质的蓄积会严重影响卵子的质量。由于脂质代谢及颗粒细胞对卵泡的发育都极为重要,因此本研究旨在探讨外源性胆固醇对KGN细胞(人卵巢颗粒细胞瘤)凋亡的影响及其机制,对进一步阐明卵泡发育异常的发病机制和防治提供新的靶点。方法:1.KGN细胞用含有10%小牛血清的DMEM高糖培养液于37°C、5%CO2培养箱中静置培养。2.不同浓度(0μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml)的外源性胆固醇处理KGN细胞24h,油红O染色观察细胞内脂质含量,NBD-Cholesterol荧光标记显示细胞内胆固醇的含量。3.外源性胆固醇处理后,检测不同浓度外源性胆固醇对KGN细胞凋亡状态的影响。4.MTT检测不同浓度外源性胆固醇对KGN细胞增殖的影响。5.用Western blot及qRT-PCR检测不同浓度外源性胆固醇对KGN细胞vigilin mRNA,vigilin蛋白、ERβ蛋白以及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2表达的影响。6.干预ERβ,观察KGN细胞的凋亡情况。结果:1.外源性胆固醇孵育KGN细胞24h,其可使KGN细胞胞体增大,细胞内脂质含量增加;处理组与对照组相比,处理组凋亡细胞增多;BAX的表达增加,BCL-2的表达降低,10μg/ml,20μg/ml外源性胆固醇处理组差异有统计学意义(P﹤0.05)。2.处理组与对照组相比,KGN细胞vigilin、ERβ的表达上调,10μg/ml、20μg/ml外源性胆固醇处理组差异有统计学意义(P﹤0.05)。3.外源性胆固醇抑制KGN细胞增殖,10μg/ml,20μg/ml外源性胆固醇处理组差异有统计学意义(P﹤0.05)。4.雌激素受体ERβ抑制剂ICI182780处理KGN细胞后,KGN细胞凋亡减少。结论:1.外源性胆固醇可促进KGN细胞凋亡,并抑制KGN细胞增殖。2.vigilin/ERβ信号分子参与外源性胆固醇对KGN细胞凋亡的调控。