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目的:原发性肝癌被预测为2018年全球第六大最常被诊断癌症和全球第四大癌症死亡原因,肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)被认为是原发性肝癌的最常见形式。大多数HCC患者表现为晚期,为了开发HCC患者治疗的新策略,对HCC发生和发展过程中涉及的分子机制的探究是必要的。血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)是血管生成的关键调控因子,抗血管生成疗法在肝癌治疗中的作用已被公认,对HCC中影响VEGFA表达的分子机制的研究十分必要。泛素特异肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)是去泛素化酶(de-ubiquitylation enzymes,DUBs)家族的一员,在HCC中,USP22起促癌作用,但具体机制尚不明确。本研究探讨了USP22调节VEGFA转录的分子机制及其对HCC细胞生长、肿瘤发生和血管生成拟态的影响,为HCC治疗及靶点的探索提供新思路。研究方法:1、Western blot法检测USP22及VEDFA蛋白在HCC组织中表达情况,Pearson相关分析分析两种蛋白在HCC组织中表达的相关性。2、siRNA沉默USP22后,Western blot法检测HIF-1α及VEGFA蛋白表达,Real-time PCR法检测HIF-1α及VEGFA mRNA表达。3、蛋白质免疫共沉淀法验证USP22与HIF-1α蛋白间的相互作用;免疫荧光染色及Confocal法检测USP22与HIF-1α蛋白在HCCLM3细胞中的定位。4、siRNA沉默USP22,加入CHX抑制蛋白合成后,Western blot法检测HIF-1α及USP22蛋白表达。5、蛋白质免疫共沉淀法检测沉默USP22后,HIF-1α泛素化水平。6、双荧光素酶报告基因实验检测USP22对VEGFA启动子区转录活性影响,染色质免疫共沉淀检测敲减USP22对VEGFA启动子区USP22,HIF-1α及H2Bub1招募的影响。7、平板克隆形成实验和MTS细胞活性检测实验检测HCC-LM3细胞增殖。8、HCC-LM3细胞裸鼠皮下荷瘤实验检测HCC肿瘤生长;9、血管内皮细胞血管形成实验及HCC-LM3细胞血管形成拟态实验检测细胞血管生成能力。结果:1、在HCC癌组织中USP22及VEGFA蛋白高表达,且二者表达呈正相关。2、沉默USP22降低VEGFA蛋白及m RNA表达,缺氧条件下,沉默USP22降低HIF-1α蛋白表达。3、缺氧条件下,USP22与HIF-1α蛋白之间存在相互作用且USP22与HIF-1α在HCC-LM3细胞中共定位于细胞核。4、缺氧条件下,沉默USP22增加HIF-1α降解速度。5、缺氧条件下,沉默USP22增加HIF-1α泛素化水平。6、过表达USP22增加VEGFA启动子转录活性,敲减USP22增加VEGFA启动子区H2Bub1招募,缺氧条件下,敲减USP22增加VEGFA启动子区HIF-1α招募。7、敲减USP22抑制HCC-LM3细胞克隆形成及增殖活性。8、敲减USP22抑制HCCLM3细胞荷瘤小鼠肿瘤生长。9、敲减USP22抑制血管内皮细胞及HCC-LM3细胞管形成能力。结论:1、USP22及VEGFA在HCC组织中高表达且正相关。2、USP22稳定缺氧条件下HIF-1α表达促进VEGFA转录。3、USP22增加缺氧条件下VEGFA启动子区HIF-1α招募促进VEGFA转录。4、USP22减少VEGFA启动子区H2B泛素化促进VEGFA转录。5、USP22促进HCC细胞增殖、肿瘤生长及血管生成拟态。