光皮木瓜籽油的亚临界萃取及果肉黄酮降尿酸作用研究

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光皮木瓜(Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne)为我国特有的野生食药两用资源。我国木瓜产量大,出籽率高,有着广阔的开发应用前景。本文以对木瓜资源高价值合理开发利用为主旨,分别以木瓜籽与木瓜果肉为研究对象,探讨木瓜资源开发利用的新途径。主要研究结果如下:1、木瓜籽油及果肉黄酮制备工艺研究以木瓜籽为原料,研究超声、微波、亚临界萃取、低温压榨这4种方法提取所得木瓜籽油得率、脂肪酸组成与相对含量的差异。结果显示得率大小为:超声(环己烷)>微波(乙酸乙酯)>亚临界萃取>低温压榨;亚临界萃取得到的油脂不饱和脂肪酸含量高于其它3种方法,品质更佳。以木瓜果肉为原料,通过单因素试验确定木瓜果肉黄酮最佳提取时间为90min,乙醇浓度为70%乙醇,料液比为1:20。AB-8大孔树脂纯化木瓜果肉黄酮的最佳上样液浓度为0.7mg/m L;洗脱溶剂为75%乙醇。纯化后,木瓜果肉黄酮CSF,纯度达78%,得率为38.9%;乙酸乙酯萃取分离后,得木瓜果肉黄酮乙酸乙酯相CSF-E,纯度达到97%,得率为5.5%。2、木瓜籽油亚临界流体萃取工艺及O/W型护肤霜研制由单因素和Box-Behnken试验分析亚临界萃取木瓜籽油的最佳工艺参数:萃取时间为35min,萃取次数为3次,萃取温度为35℃,粉碎目数为40目。在此条件下木瓜籽油得率为29.56%。所得木瓜籽油相对密度0.85,酸值0.53mg KOH/g等;含有黄酮(15.32mg/kg)、维生素E(0.957mg/kg)、多酚(527mg/kg)等营养成分,并且重金属含量低。以该木瓜籽油为油相基质,采用综合评分,经过大量单因素与正交试验优化木瓜籽油O/W型护肤霜的组分用量,得到最佳配方为:木瓜籽油5%、二甲基硅油2%、十八醇5%、液体石蜡0.5%、羊毛脂0.75%、单甘脂5%、甘油3%、三乙醇胺2.5%、硬脂酸6%、去离子水69.5%。3、CSF-E结构鉴定与体外生物活性研究CSF-E总黄酮含量为973.1 mg RE/g,总酚含量为460.6 mg GAE/g。利用HPLC-DAD-ESI-MS/MS对CSF-E进行分析,快速分离鉴定出原花青素低聚体,新橙皮苷,芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷,商陆素,槲皮苷等8个黄酮类化合物。在体外自由基清除研究中,CSF-E表现出良好的总抗氧化能力,对DPPH,O2-,·OH,H2O2均表现出显著的清除能力,且呈剂量-依赖关系。同时,体外对XOD具有较强的抑制能力(IC50=207.656μg/m L),Lineweaver-Burk曲线表明CSF-E对XOD的抑制为竞争性抑制作用。4、CSF-E对高尿酸血症的影响及机制分析小鼠高尿酸血症的最佳建模时间为2h。灌胃CSF-E一周后,CSF-E高、中、低剂量均可显著降低造模小鼠血清尿酸以及肌酐、BUN水平;显著抑制造模小鼠血清及肝脏XOD活性;并且能下调m URAT1蛋白水平减少尿酸重吸收,上调m OAT1蛋白水平促进尿酸排泄;中剂量的CSF-E可使造模小鼠肝MDA水平明显降低,而SOD和GSH-Px二者的酶活力明显升高。提示CSF-E主要通过抑制XOD活性与调控尿酸转运蛋白促进尿酸排泄两条途径来实现体内降尿酸作用,达到防治高尿酸血症的目的。
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