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研究目的:环杷明(cyclopamine)作用于人腮腺多形性腺瘤(human salivary pleomorphic adenoma,HSPA)细胞后,探讨其对该细胞凋亡作用的影响,了解细胞凋亡形态的改变,研究其对细胞 Gli-2和Bcl-2 mRNA表达的影响及细胞凋亡率的变化。 研究方法:将人腮腺多形性腺瘤细胞分成三组,分别是空白对照组、DMSO对照组和实验组(环杷明组)。(1)分别用0.08%DMSO和10μmol/L cyclopamine处理人腮腺多形性腺瘤细胞48 h,于倒置显微镜下观察三组细胞数量及其形态的改变;(2)分别用0.08%DMSO和用10μmol/L cyclopamine处理人腮腺多形性腺瘤细胞48 h,Real-time PCR检测空白对照组、DMSO对照组和实验组(环杷明组)Gli-2、Bcl-2 mRNA表达水平的差异;(3)分别用0.08%DMSO和用10μmol/L cyclopamine处理人腮腺多形性腺瘤细胞24 h,流式细胞术观察空白对照组、DMSO对照组和实验组(环杷明组)细胞凋亡率的变化。 实验结果:(1)用10μmol/L cyclopamine作用于人腮腺多形性腺瘤细胞48 h后,倒置显微镜下可见细胞数量明显减少,细胞核碎裂或固缩、细胞核仁变形等典型的细胞凋亡形态变化;(2)Real-time PCR结果显示:环杷明组(实验组)与空白对照组、DMSO对照组相比,环杷明组可以显著下调Gli-2和Bcl-2 mRNA的表达,其差异具有统计学意义(P<0.01),空白对照组与DMSO对照组的Gli-2及Bcl-2 mRNA的表达无明显差异,其结果没有统计学意义(P>0.05);(3)流式细胞术结果显示:环杷明组的细胞凋亡率显著高于空白对照组和 DMSO对照组,其结果具有统计学意义(P<0.01)。空白对照组和DMSO对照组的细胞凋亡率无明显差异,其结果没有统计学意义(P>0.05)。 实验结论:本次实验从形态学方面、mRNA方面以及细胞凋亡率方面检测到了人腮腺多形性腺瘤细胞的凋亡,证实该细胞的凋亡活动与环杷明密切相关。其作用机制可能是:环杷明作用于人腮腺多形性腺瘤细胞后下调了细胞Gli-2 mRNA的表达,从而引起Bcl-2 mRNA表达的降低,活化细胞凋亡的线粒体途径,引起细胞的凋亡。