【摘 要】
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该工作利用DNA重组技术构建了三个植物表达载体:pCAMBIA1300-AtNHX1-als、pCAMBIA1300-betA-als和pROK2-asPLDγ-als.基因AtNHX1编码拟南芥液泡膜上的Na/H反向转运蛋白.在盐
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该工作利用DNA重组技术构建了三个植物表达载体:pCAMBIA1300-AtNHX1-als、pCAMBIA1300-betA-als和pROK2-asPLDγ-als.基因AtNHX1编码拟南芥液泡膜上的Na<+>/H<+>反向转运蛋白.在盐胁迫条件下,Na<+>/H<+>反向转运蛋白被激活,将Na<+>泵入液泡储存起来以消除离子毒害,从而提高植物耐盐性.betA基因来自大肠杆菌,编码胆碱脱氢酶(CDH),它能够催化胆碱形成甜菜碱.转betA基因的植物积累甘氨酸甜菜碱的能力增强,因而抗逆性得到提高.asPLDγ基因来自蓖麻,是PLDγ的反义基因,PLDγ编码磷脂酶D,该酶活性降低可减轻细胞遭受胁迫后的膜结构损伤和正常代谢功能的下降.乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthase,ALS)是分支氨基酸合成中的关键酶,也是磺酰脲类除草剂的作用位点.拟南芥(Arabidopsis thaliana)的als基因中特定碱基发生突变,使之对该类除草剂表现出抗性.采用农杆菌介导法转化烟草叶盘,获得了双抗(抗除草剂、耐盐)转基因植株.PCR检测结果表明,同一载体上的两个基因转入到大部分转化植株中.pCAMBIA1300-AtNHX1-als、pCAMBIA1300-betA-als转化的烟草再生植株耐盐性和除草剂抗性均有显著提高.与对照植株相比,耐盐性提高了1.0﹪NaCl浓度,除草剂抗性提高了约1000倍.Southern杂交结果表明,AtNHX1基因已经整合到烟草的染色体上.对转AtNHX1基因的T1代烟草植株喷洒500mg/L的除草剂绿黄隆,其存活率为72.7﹪,而对照植株在100mg/L的除草剂浓度下就已经全部死亡,表明als基因在转基因植株后代中正常表达.关于植物表达载体pROK2-asPLDγ-als的在转基因植株中的表达研究目前尚在进行.
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