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长鞭红景天( Rhodiola fastigiata),是一种珍稀的中药材,属于被子植物门(Angiospermae)景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.)多年生草本,药用有效成份红景天苷和苷元酪醇。因长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)生长与分布环境的差异,同一居群与不同居群之间在遗传多样性上呈现一定变化,这些变化和差异是长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)不同居群对特定生态环境及其变化的长期适应和进化的结果。本文以西藏色季拉山的高寒植物长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)为材料,选取分布在海拔4300～4700M范围内的长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)的3个居群为研究对象,采用AFLP分子标记技术,对长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)3个居群的30个个体进行种内遗传多样性分析,并依据扩增条带所得数据进行聚类分析,同时对这30个个体的遗传指标进行相关分析,为更有效地保护和利用这种珍稀药用植物提供理论依据。主要研究结果如下:1.高质量基因组DNA抽提方法的改进:通过改良的CTAB法,成功抽提红景天属植物的基因组DNA,经琼脂糖凝胶电泳检测,所提DNA电泳后呈整齐清晰的一条带,点样孔附近无滞留物质,且没有降解拖尾现象,另经紫外分光光度计检测,OD260/OD280值均在1.8左右。另本研究中建立的提取高质量基因组DNA方法已成功地应用于其他高寒植物(大花黄牡丹、垫状雪灵芝等)。2.引物对获取及多态性带:以形态学差异较大的2份红景天属植物(Rhodiola fastigiata,Rhodiola yunnanensis)为试验材料,从64对引物中,筛选出4对多态性较高的AFLP引物组合(E-ACA:M-CAC;E-ACA:M-CAT;E-ACA:M-CAG;E-ACT:M-CTA;)。这4对引物对西藏色季拉山的高寒植物长鞭红景天的30份供试样品进行了AFLP分析,扩增得到510条清晰的谱带,其中多态带345条。3.简易银染方法的建立:a固定液(100ml乙醇+5～10ml冰醋酸+900ml去离子水)(12分钟);b银染液(1.5～2ml甲醛+1.5～2g硝酸银+1000ml去离子水)(10～14分钟);c1000ml去离子水水洗15秒;d显影液(2～3ml甲醛+15～25gNaOH+1000ml去离子水)(直到出现清晰条带);e用上述1液体固定2～3分钟;f用1000ml去离子水洗脱2～3分钟后,室温下放置胶板。4.AFLP分析体系的建立:基因组DNA模板300ng,20ul酶切与连接体系,酶切与连接一步完成(37℃,5h;8℃,4h;4℃,过夜);25ul的预扩增体系,酶切与连接处理后的模板DNA 2ul,Taq酶0.5ul,Pre-ampmix 1ul,10 PCR buffer 2.5ul,灭菌双蒸水18.5ul;25ul选择性扩增体系,预扩增稀释样品2ul,10 PCR buffer 2.5ul,dNTPs 0.5ul,EcoRⅠ引物2ul,MseⅠ引物2ul,Taq酶0.5ul,灭菌双蒸水17.5ul;5.遗传多样性分析指标:在物种水平上,具有高的遗传多样性。物种水平多态百分率(PPL)为96.61%,Shannon s信息指数I=0.4893,Nei基因多样性指数H=0.3329;居群水平上,平均多态性百分率(PPL)为64.97%,Nei基因多样性指数H=0.2404,有效等位基因数Ne=1.4252,Shannon s信息指数I=0.3545;高寒植物长鞭红景天居群间的遗传分化Gst为0.2779,说明27.79%的遗传变异存在于居群之间,而71.21%的遗传变异存在于居群内,长鞭红景天的居群间的基因流Nm为1.2995。6.试验结果表明,AFLP分子标记技术可以用于高寒植物长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)遗传多样性的研究。