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猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种肠道接触性传染病,该病对哺乳仔猪的致死率高达90%。近年来,PEDV在世界范围内再次暴发,呈现明显的抬头趋势。磷酸化作用是瞬时蛋白质修饰最普遍形式,病毒利用宿主激酶系统对病毒蛋白质进行磷酸化修饰从而获得高效的感染及控制宿主先天免疫。然而,目前关于PEDV感染介导宿主细胞磷酸化蛋白变化的报道较少。本研究中,利用等重同位素多标签相对定量磷酸化蛋白质组学技术对PEDV感染的Vero E6细胞(V组,3个生物学重复)和PEDV未感染的Vero E6细胞(C组,3个生物学重复)差异表达的磷酸化蛋白进行筛选和功能解析。结果显示,在V组和C组中,鉴定磷酸化肽段总数2 385个,鉴定磷酸化蛋白数为1134个(已知磷酸化蛋白455个,未知磷酸化蛋白679个)。在V组和C组中一共存在109个差异表达磷酸化蛋白(p<0.05,V/C或C/V>1.5),其中,差异表达磷酸化蛋白中上调的磷酸化蛋白数为72个,下调磷酸化蛋白数为37个。GO分析结果显示,109个差异表达的磷酸化蛋白的分子功能主要为结合作用。KEGG Pathway分析结果表明,109个差异表达的磷酸化蛋白参与113条信号通路,其中Toll样受体、MAPK、PI3K/Akt、RIG-Ⅰ和m TOR信号通路与PEDV感染具有相关性。另外,参与信号通路的热休克蛋白27(Hsp27)与PEDV感染具有相关性。Western blot试验结果显示,上调Hsp27的验证结果与i TRAQ磷酸化蛋白质组学结果一致。PEDV感染Vero E6细胞活化热休克蛋白70,Hsp70的差异表达直接影响PEDV mRNA水平的相对表达量。本研究获得了PEDV感染Vero E6细胞后差异表达磷酸化蛋白信息,解析了差异蛋白的功能,揭示了其与PEDV感染相关的信号通路,为PEDV致病机理的深入研究提供了基础信息。