体细胞核移植技术是动物胚胎工程中一种比较重要的技术,对于体外胚胎的大量生产具有十分重要的意义,但是就目前的发展状况来看,这项技术的成功率还比较低,不能用于实际的生产。其中造成这样的结果的一个比较重要的原因就是供体细胞核的不完全重编程。所以本实验从供体组蛋白乙酰化入手,研究组蛋白乙酰化对于重编程的影响。针对以上的问题,本实验以第6代牛胎儿成纤维细胞作为供体细胞,以牛卵母细胞作为受体进行研究,得到如下结果与结论：1.用3 mmol/L丁酸钠(NaBu)分别处理供体细胞0、48和72、96h,通过核移植检测克隆胚胎发育率,并应用激光共聚焦显微镜技术检测处理之后的细胞的组蛋白H3K9、14乙酰化水平。结果显示：随着NaBu处理时间的延长,供体细胞组蛋白H3K9、14乙酰化水平不断增高；用NaBu处理之后的成纤维细胞就行核移植,以3mmol/L NaBu处理供体细胞48h的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(32.5%vs22%,p<0.05)。结论：3 mmol/LNaBu处理供体细胞48h更易使重编程的过程发生,显著提高了克隆胚的体外发育能力,初步证实NaBu是通过提高供体细胞组蛋白乙酰化水平来促进供体细胞重编程。2.采用组蛋白乙酰化酶抑制剂(NaBu)处理成纤维细胞,除了其对细胞组蛋白乙酰化有影响之外,考虑其对细胞特性的一些影响。尝试着确定NaBu的最佳处理浓度和最佳处理时间,使其既不影响体细胞生物学特性,又可提高供体细胞组蛋白乙酰化状态的方法,从而提供一种提高体细胞克隆动物效率的方法。实验中用NaBu分别处理奶牛成纤维细胞0、48、72、96h,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的情况,用MTT法检测NaBu对成纤维细胞活性的影响。结果显示：处理组细胞形态发生了改变,不规则生长,细胞之间接触不紧密,还出现脱壁死亡的现象。经3 mmol/L NaBu处理的细胞在G0/G1期的百分比与未经处理的对照组相比略有降低；从琼脂糖凝胶电泳图谱上可见从72h开始出现拖带现象,说明细胞的DNA开始有断裂。用Annexin V联合PI法检细胞凋亡,发现随着处理时间的加长,处理组与对照组相比发生凋亡的和死细胞的比例显著增加。总之,此实验的结果说明用3 mmol/LNaBu对供体细胞处理48h,细胞凋亡相对较低,处于G0/G1期的细胞比例达到75%以上,但是高浓度处理则会导致DNA断裂与细胞凋亡显著增加,虽然细胞的乙酰化程度有很高的提高,不但是能用于体细胞克隆动物的生产。