论文部分内容阅读
目的:观察COX–2/5–LOX双重抑制剂darbufelone对胃癌SGC–7901细胞增殖、凋亡的影响;检测darbufelone对胃癌SGC–7901细胞线粒体膜电位、活性氧及凋亡相关因子的影响,初步探讨darbufelone诱导胃癌SGC–7901细胞凋亡可能的机制;观察COX–2和5–LOX蛋白质在人胃癌组织中的表达情况。方法: MTT法检测darbufelone对胃癌SGC–7901细胞增殖的影响;TUNEL法检测胃癌细胞的凋亡指数;RT–PCR法检测加药前后COX–2、5–LOX、Bax、Bcl–2和caspase–3 mRNA的变化;免疫细胞化学法检测COX–2、5–LOX、Bax、Bcl–2和caspase–3蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞活性氧和线粒体膜电位变化;免疫组织化学法检测人胃癌组织及相匹配的癌旁正常组织中COX–2和5–LOX蛋白质的表达水平。结果: Darbufelone抑制人胃癌SGC–7901细胞增殖,其24、48、72 h半数细胞抑制率所需药物浓度分别为6.1×10-5、5.0×10-5、3.0×10-5 mol?L-1;1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6 mol?L-1 darbufelone作用SGC–7901细胞72 h后,细胞凋亡率分别为(30.3±2.1)%、(23.0±2.0)%和(15.0±1.5)%,均显著高于对照组(0.6±0.1)%(,P < 0.01); 1.5×10–5 mol?L–1 darbufelone处理胃癌SGC–7901细胞72 h后,Bcl–2、5–LOX、COX–2、caspase–3、Bax mRNA的相对表达量分别为0.13±0.01、0.21±0.02、0.29±0.02、0.38±0.03、0.27±0.03,分别与对照组(0.27±0.02、0.78±0.05、0.63±0.05、0.12±0.02、0.16±0.02)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);1.5×10–5 mol?L–1 darbufelone作用胃癌SGC-7901细胞72 h后,Bcl–2、5–LOX、COX–2、caspase–3、Bax蛋白质的AOD值分别为0.15±0.01、0.09±0.01、0.12±0.01、0.33±0.03、0.25±0.01,分别与对照组(0.29±0.02、0.34±0.03、0.38±0.04、0.09±0.02、0.12±0.02)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);1.5×10–5 mol?L–1 darbufelone作用胃癌SGC–7901细胞72 h后,细胞内活性氧显著增多,线粒体膜电位显著下降;胃癌组织中5–LOX蛋白质的AOD值为0.42±0.14,显著高于其在癌旁组织中的AOD值(0.22±0.10),(P<0.05);胃癌组织COX–2蛋白质的AOD值为0.39±0.12,显著高于其在癌旁组织中的AOD值(0.19±0.08),(P<0.05)。结论: Darbufelone可抑制胃癌SGC–7901细胞增殖,诱导其凋亡。Darbufelone诱导人胃癌SGC–7901细胞凋亡可能是通过线粒体途径:减少Bcl-2,增加Bax及活性氧生成增加,使细胞氧化损伤增加和抗氧化能力的下降,导致线粒体膜受损,线粒体内凋亡活性物质释放,继而激活caspase–3,诱导胃癌细胞凋亡;COX–2和5–LOX蛋白质在人胃癌组织中高表达,COX–2/5–LOX双重抑制剂darbufelone对治疗胃癌有潜在的临床价值。