六品种小型猪SLA-DQB、DRB基因外显子2的群体分子遗传结构分析

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主要组织相容性复合体(Maior histocopitibility complex,MHC)指集中于某一染色体、编码与免疫应答直接相关的一类细胞膜糖蛋白基因群。其功能不仅限于移植排斥反应,它还与机体对外源性抗原的免疫应答之间存在关联。主要组织相容性复合物是目前已知多态性最丰富的基因系统,本研究主要对186头6品种小型猪的SLAⅡ类基因DQB和98头3品种小型猪的SLAⅡ类基因DRB的外显子2进行了PCR-RFLP酶切分型,扩增片段包含部分第1内含子、完整第2外显子及部分第2内含子,DQB为326bp、DRB为311bp,同时本研究对这两个基因的扩增片段进行了克隆测序,并进行群体的遗传结构分析和进化分析,结果如下:采用RsaⅠ和HinfⅠ两种限制性内切酶对甘孜藏猪、合作猪、滇南小耳猪、巴马小型猪、五指山猪和荷包猪6个品种的186头个体进行了SLA-DQB基因的PCR-RFLP分型;SLA-DQB片段经RsaⅠ酶切得到5种等位基因,14种基因型(CC、DD、GG、FF、CD、CG、CE、CF、DG、DE、DF、GE、GF、EF),各个猪种中的基因型分布在5~10种之间,6个猪群的杂合度(He)在0.5384~0.7288之间,且华北型(0.7288)>华南型(0.7161)>高原型(0.6913),巴马小型猪的PIC值(0.4884)略小于0.5,偏向于高度多态,其它5个群体的PIC值在0.5712~0.7285之间,均大于0.5,表现为高度多态;经卡方适合性检验:甘孜藏猪,巴马小型猪和五指山猪的卡方适合性检验值均低于显著水平(P>0.05),达到了Hardy-Weinberg平衡状态。合作猪,滇南小耳猪和荷包猪在该位点均未达到Hardy-Weinberg平衡状态;经HinfⅠ酶酶切,得到了3种等位基因,6种基因型(HH、II、JJ、HI、HJ、U),He在不同的生态类型猪种中的分布为:华北型(0.5238)>高原型(0.4350)>华南型(0.4286),PIC值在0.2908~0.4610之间,在该位点表现为中度多态。在不同的生态类型中,其PIC值大小依次为:华北型>华南型>高原型,经卡方适合性检验,甘孜藏猪,滇南小耳猪,巴马小型猪,荷包猪的卡方适合性检验值均低于显著水平(P>0.05),达到了Hardy-Weinberg平衡状态。合作猪,五指山猪在该位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态。SLA-DRB片段经RsaⅠ酶酶切,得到了5种等位基因(R、S、T、U、V),9种基因型,三个群体中,S是优势等位基因(0.6786),V为劣势等位基因(0.0562),PIC值大小依次为:合作猪(0.5875)>五指山猪(0.4780)>荷包猪(0.3314);He值的大小依次为:合作猪(0.6306)>五指山猪(0.5122)>荷包猪(0.3448);经卡方适合性检验,合作猪卡方值低于显著水平(P>0.05),达到Hardy-Weinberg平衡状态,五指山猪,荷包猪没有达到Hardy-Weinberg平衡状态;经MspⅠ酶酶切,得到了两种等位基因,3种基因型(PP、QQ、PQ),Q为优势等位基因(0.5918),P为劣势等位基因(0.4082),PIC值大小依次为:荷包猪(0.3713)>合作者(0.3680)>五指山(0.3579)。He值的大小依次为:荷包猪(0.4927)>合作猪(0.4861)>五指山(0.4669),经卡方适合性检验,合作猪,五指山猪和整个群体的卡方检验值均低于显著水平(P>0.05),在MspⅠ位点达到Hardy-Weinberg平衡状态,荷包猪没有达到Hardy-Weinberg平衡状态。本试验测定了26条DQB序列和11条DRB序列,在DQB中得到了15种等位基因,在DRB中得到6种等位基因,并根据SLA的命名规则进行了命名,DQB基因总体平均基因多样度为0.9140,总体的平均核苷酸平均差异数为12.215;DRB基因总体平均基因多样度为0.909,总体的平均核苷酸平均差异数为22.873;SLA-DRB基因比SLA-DQB基因具有更丰富的氨基酸变异和核苷酸变异。
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