成纤维细胞生长因子-8a(Fibroblast Growth Factor-8a, FGF8a)是成纤维细胞生长因子家族(Fibroblast Growth Factor Family, FGFs 家族)的第8 个成员FGF8 的a 亚型,不仅是胚胎发育阶段必需的细胞调节因子,更有多种生物学功能,能够高效安全地促进组织损伤的修复,还在神经干细胞培养过程中起重要的营养和诱导作用,因此有广阔的临床应用前景。重组人FGF8a(recombinant human fibroblast growth fator-8a,rhFGF8a)是将人FGF8a 基因经过体外改造克隆后以生物工程菌表达得到的多肽。具有与天然FGF8a 一致的活性。同时,与从天然动物组织中提取得FGf8a 相比,更具有产量高、成本低,资源丰富的优点。本文所阐述的研究内容,是rhFGF8a 课题的一个部分,是广州拜迪生物医药有限公司与新西兰皇家科学院合作项目的子课题。主要目的是构建新的高效表达rhFGf8a 的载体,并选择合适的表达宿主对其进行表达,完成高效表达rhFGF8a 的上游工作。本研究采用分子克隆技术、PCR 扩增技术和DNA 点突变技术,对rhFGF8a基因进行改造,再分别构建到pET22b(+)和pET28a(+)两质粒上,以大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)pLysS 进行诱导表达,得到具有活性的rhFGF8a多肽。并且比较了新构建的两种质粒与前期rhFGF8a课题研究所构建的rhFGF8a原质粒在两种表达宿主中的表达量,发现经过基因改造后的rhFGF8a-pET22b质粒和pET28a-rhFGF8a 质粒在两种表达宿主中的表达量都大大高于未改造的rhFGF8a 原质粒。两种新的高效表达载体rhFGF8a-pET22b 质粒和pET28a-rhFGF8a 质粒已符合工业化生产的需要。此外,本研究还就rhFGF8a 表达工程菌的培养条件、诱导流程,分离纯化和体外复性进行了初步的探索,为rhFGF8a 课题的后续工作提供了参考数据并具有指导意义。