第一部分小鼠脑缺血再灌注模型诱导免疫抑制与肺部感染易感的相关性目的:探讨脑缺血再灌注小鼠诱导的免疫抑制与肺部感染易感的相关性。方法:取体重20-25 g的C57/BL6雄性小鼠（购自湖北省疾病预防控制中心）,通过线栓法建立脑缺血再灌注小鼠模型（MCAO）,通过向气管内定量注入致病菌模拟肺部感染的发生。将小鼠分为对照组、肺部感染模拟组（SP组）、MCAO组、脑缺血再灌注后肺部感染模拟组（SAP组）。24 h后收集各组肺泡灌洗液（BAL）及外周血标本,通过ELISA方法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-10（IL-10）表达量,计算BAL、血标本、肺匀浆中的菌落计数（CFU）;72 h后观察肺和脾组织的病理改变并进行肺组织病理评分,计算MCAO组及SAP组脑梗死体积。结果:SAP 组外周血 TNF-α[（87.20±4.37）ng/L]、IFN-γ[（86.71± 11.25）ng/L]均较对照组[（112.96±9.91）ng/L、（126.42± 14.61）ng/L]降低（t=5.32,4.815,P<0.05）,IL-10[（192.36± 20.23）pg/ml]表达量明显高于对照组[（148.85± 22.35）pg/ml]（t=-3.227,P<0.05）;而BAL中SAP组[（47.13± 3.84 ng/L）]除TNF-α较SP组[（64.31±11.25）ng/L]降低外（t=-3.236,P<0.05）,其余各种炎性因子水平与对照组及SP组变化不明显。SAP组外周血[（6.77±16.79）×104 CFU/ml]、BAL[（14.07±7.59）× 105 CFU/ml]及肺匀浆[（5.03± 2.85）× 106 CFU/ml]中的荷菌量明显较SP组[0 CFU/ml、（7.69±14.74）×104CFU/ml、（9.76±9.24）×104CFU/ml]增加。光镜下显示SAP组肺部炎症严重程度强于对照组,但轻于SP组,与肺组织病理评分相一致[SAP 组评分为（9.00±2.27）,对照组（0.53±0.30）,SP 组（15.20±2.52）,均P<0.05]。SAP组与MCAO组存在脾细胞凋亡现象,但两组的脑梗死体积比较差异无显著性意义（t=-0.435,P=0.677）。结论:脑缺血再灌注诱导的免疫抑制增加肺部感染发生的易感性。第二部分Orexin-A改善急性缺血性脑卒中诱导的免疫抑制目的:观察外源性Orexin-A对急性缺血性脑卒中诱导免疫抑制的影响。方法:取C57/BL6小鼠随机分为对照组（CON组）、脑缺血再灌注组（MCAO组）、脑缺血再灌注后Orexin-A干预组（MCAO+OXA组）、肺部感染模拟组（SP组）、模拟肺部感染后Orexin-A干预组（SP+OXA组）、脑缺血再灌注后肺部感染模拟组（SAP组）、Orexin-A干预脑缺血再灌注后肺部感染模拟组（SAP+OXA组）。收集各组外周血及肺泡灌洗液（BAL）并检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-10（IL-10）表达量;计算BAL、血标本、肺匀浆中的菌落计数（CFU）,并比较在给予Orexin-A后对卒中诱导免疫抑制的影响。72 h后使用TTC染色评估Orexin-A对缺血再灌注损伤后脑梗死体积的影响。采用免疫组化和免疫荧光染色,评估Orexin-A能否改善缺血再灌注后炎性神经损伤。结果:（1）肺泡灌洗液（BAL）中抗炎细胞因子IL-10的水平:在SP组的表达最高且与CON组之间差异明显（P>0.05）,而其他各组灌洗液中的表达差异无明显统计学意义。（2）血清IL-10:MCAO组与SAP组的表达量明显高于CON组（P<0.05）;当予以OXA处理后,MCAO+OXA组的IL-10水平明显低于MCAO组（P<0.05）。（3）各组血标本、灌洗液标本中TNF-α、IFN-γ水平差异无显著性。（4）SAP+OXA组的促炎细胞因子TNF-α含量明显高于SAP组。（5）各组肺匀浆液、肺泡灌洗液以及血标本的细菌菌落培养,在OXA干预后,SAP+OXA组的荷菌量明显少于SAP组（P<0.01）。（6）OXA干预后,小胶质细胞在缺血半暗带区域的浸润数量减少,且与MCAO组小胶质浸润程度上,具有显著性差异（P<0.01）。（7）与未给药组相比,MCAO+OXA组脑梗死体积百分比降低,而神经功能评分得到提高（P<0.05）。结论:脑缺血再灌注小鼠在予以OXA后,脑梗死面积减小、炎性神经损伤减轻,同时外周免疫抑制得到缓解。第三部分Orexin-A通过NF-κB通路调节小胶质细胞炎性神经损伤的作用目的:探讨Orexin-A调节脑缺血再灌注后炎症神经损伤的机制。方法:C57/BL6小鼠随机分为对照组（CON组）、脑缺血再灌注组（MCAO组）、脑缺血再灌注后Orexin-A干预组（MCAO+OXA组）。Western blot检测小鼠缺血半暗带区域NF-κB信号通路主要蛋白p65、p-p65、IKBα、p-IKBα的表达;使用PCR检测炎性细胞因子IL-1β（mRNA）、TNF-α（mRNA）转录水平。免疫荧光染色分别标记Iba1阳性细胞和p65阳性细胞,评估p65是否存在核转位。结果:（1）在脑缺血再灌注72 h后,MCAO组IKBα表达量较CON组明显降低（P<0.01）;而OXA干预后,表达量较MCAO组明显增加,统计学差异显著（P<0.01）。（2）MCAO组胞浆内p65与p-IKBα、p-p65蛋白的表达量增加,且均明显高于CON组各指标的表达（P<0.05）;而在MCAO+OXA组各指标的表达量上均明显低于MCAO组（P<0.05）。（3）免疫荧光共定位结果显示,MCAO组Iba1阳性的小胶质细胞浸润数量和p65蛋白的表达量明显增加（P<0.05）。（4）在MCAO+OXA组,Iba1阳性的小胶质细胞浸润数量和p65蛋白的表达量高于CON组,但低于MCAO组;且p65蛋白在Iba1阳性小胶质细胞的胞核内少见。（5）促炎细胞TNF-α、IL-1β的转录水平在OXA干预后降低（P<0.05）。结论:OXA通过NF-κB信号通路调节小胶质细胞的活化,进而调节炎性神经损伤,发挥神经保护作用。第四部分急性缺血性脑卒中患者中血清Orexin-A水平及与肺部感染的相关性目的:通过检测血清Orexin-A在急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）患者中的变化水平,来探究与卒中相关性肺炎发生的相关性。方法:连续入选2019年7月至2020年1月期间,在我院神经内科监护室住院治疗的78例AIS患者（卒中组）,依据卒中相关性肺炎（Stroke-associated Pneumonia,SAP）的诊断标准将其分为肺部感染组和非肺部感染组;对照组10例,选取自同时期住院并诊断短暂性脑缺血发作（Transient Ischemic Attacks,TIA）的患者。收集、整理各组病历资料并抽取入院次日清晨的血标本。使用ELISA试剂盒检测各组血清Orexin-A水平。采用SPSS统计软件对患者一般资料、血生化检验结果以及Orexin-A的水平进行统计分析。分析影响发生SAP的高危因素、Orexin-A水平与SAP发生及其危险因素的相关性。结果:78例AIS患者中,47例为非肺部感染组,31例合并卒中相关性肺炎（肺部感染组）。卒中组患者与对照组相比,Orexin-A含量显著降低（P<0.05）,但两组在其他资料比较上,无显著性差异（P>0.05）。肺部感染组与非肺部感染组在年龄、性别、有无房颤、NIHSS评分、吞咽功能障碍、梗死范围、白细胞计数、中性粒计数、血小板计数、ICU住院时间占比指标方面,均存在显著性差异（P<0.05）。对上述存在差异的指标采用二元logistic回归分析,发现白细胞计数、有无房颤、梗死范围、NIHSS评分为SAP发生的独立危险因素。而Orexin-A水平与NIHSS之间存在显著负相关（r=-0.241,P<0.05）。结论:AIS患者血清Orexin-A含量降低,而合并SAP的患者含量更低。Orexin-A的变化与AIS后神经损伤严重程度相关。