胰岛移植是治疗Ⅰ型即胰岛素依赖型糖尿病的一种非常有效的方法，它通过β细胞的替代治疗实现病人血糖的自我调节。但目前抑制免疫免疫排斥所使用的免疫抑制剂，给病人带来严重的副作用，实现无免疫抑制剂移植成为胰岛移植研究的一个重点。为实现无免疫抑制剂胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病，本研究利用旋转壁式生物反应器模拟的微重力条件共培养大鼠胰岛和睾丸支持细胞，以形成具有内分泌功能和免疫豁免特性的胰岛-睾丸支持细胞复合物，并对复合物的形成条件，形态，体内移植后功能、分布进行了研究。采用胶原酶单次震荡消化法获得大鼠睾丸支持细胞，采用低渗处理及差速贴壁法除去精细胞和血细胞，并通过Fas-L免疫组化染色检测其纯度。采用结扎灌注消化法及Dextran不连续密度梯度法获得纯化胰岛，并通过DTZ特异染色对其进行鉴定，计数，通过AO-PI双染色法确定胰岛细胞存活率，通过葡萄糖刺激实验检测其内分泌活性。将胰岛培养于生物反应器中，检测其活性变化。将睾丸支持细胞分别与淋巴细胞、胰岛共培养，检测其杀伤淋巴细胞的作用及对胰岛营养支持作用。将纯化的胰岛与睾丸支持细胞在旋转壁式生物反应器中共培养5 d，通过透射电镜及扫描电镜对形成的细胞复合物SICA的超微结构进行观察，葡萄糖刺激实验对SICA的内分泌活性进行检测。将复合物移植入链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病SD大鼠模型，检测血糖变化；对血糖保持正常20 d以上的大鼠进行糖耐受试验；切除移植物侧的肾，进行切片HE染色及胰岛素和Fas-L免疫组化染色检测肾中的移植物。将支持细胞，新鲜胰岛及生物反应器单独培养的胰岛分别移植入糖尿病受体，并将SICA移植入正常大鼠作为对照组。主要结果如下： 1．通过Ⅴ型胶原酶单次消化及差速贴壁，低渗缓冲液处理，每克睾丸湿重可获得6.5×10~5个纯化睾丸支持细胞。原代分离的细胞具有良好的活力，细胞存活率可达到85％，并且没有大的细胞团；接种于培养瓶种后，细胞增殖迅速，并在培养的第8日达到最高峰：绝大多数细胞呈Fas-L免疫组化染色阳性，细胞纯度可达95％。 2．通过Ⅴ型胶原酶灌注可使大鼠胰腺组织充分膨胀，并且得到比剪碎消化法更充分的消化效果。消化产物通过11％，22％，27％，32％Dextran溶液梯度离心后，平均每个大鼠胰腺可获得4040IEQ纯化的胰岛细胞团。纯化后的胰岛用双硫腙(DTZ)染色后，在倒置显微镜下观察可看到，细胞团保持着完整的结构，未着色的外分泌部很少，表明细胞纯度很高。 3．在生物反应器中培养5 d的胰岛细胞团相对于平皿静态培养的胰岛细胞团结构更完整，更接近于新鲜分离的胰岛细胞团。葡萄糖刺激试验显示前者保持着更好的胰岛素