土家药“江边一碗水”的质量标准及炮制工艺优化研究

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“江边一碗水”为小檗科山荷叶属植物南方山荷叶(Diphylleia sinensisH.L.li.)的根及根茎,通常生长在狭谷沟边及高山林下阴湿处,分布于我国的甘肃、湖北、云南、陕西、西藏、四川等省。“江边一碗水”是我国武陵山区土家族常用的民族药材,具有活血化瘀、抗炎止痛、清热凉血等作用,土家医临床上习惯将之用于治疗癌症、跌打损伤、风湿性关节炎等病症。  “江边一碗水”为鬼臼类植物,鬼臼类药材资源稀少,名字繁多,一直存在品种混用的现象。因此对其确定其药效物质基础,规范和优化炮制工艺,建立和完善药材及饮片质量标准具有十分重要的意义。  本论文从药材质量标准、炮制工艺、化学成分、抗肿瘤药效物质基础等方面对“江边一碗水”药材进行了较系统的研究,为“江边一碗水”药材研究提供了可靠的依据:  1、“江边一碗水”的炮制工艺研究:通过醋炙法、醋蒸法、童便浸泡法、姜汁法、醋磨法5种炮制方法,考察“江边一碗水”药材中鬼臼毒素的含量变化,并用正交实验考察其中含量变化较大的三种炮制方法:醋炙法、醋蒸法、童便浸泡法,优选较优炮制工艺。结果可知鬼臼毒素含量依次为:醋炙品>醋蒸品>醋磨制品>生品>童便浸泡制品>姜汁制品,根据结果和土家医用药习惯,我们选择了醋炙法进行系统深入研究,并对其炮制工艺进行了优化,“江边一碗水”醋炙法的最佳炮制工艺为:食醋用量为30%,闷润2 h,炒制(炒制温度150℃,时间为4 min)晾凉,包装。  2、“江边一碗水”的化学成分研究:利用系统溶剂提取法、正相硅胶柱色谱法、制备HPLC法进行分离和纯化,从“江边一碗水”不同提取部位中得到了14个化合物,采用NMR,MS等光谱学技术测定并结合理化性质鉴定得出12个化合物,其中6个木脂素类化合物,5个黄酮类化合物,1个甾醇类化合物,分别为:鬼臼毒素、苦鬼臼毒素、山荷叶素葡萄糖苷、苦鬼臼毒素葡萄糖苷、去氢鬼臼毒素、4′-去甲基去氢鬼臼毒素、山奈酚、3-O-甲基槲皮素、槲皮素、槲皮苷、芦丁、β-谷甾醇。  3、“江边一碗水”的质量标准研究:对“江边一碗水”药材的质量标准进行系统研究,包括定性鉴别和有效成分的含量测定。以鬼臼毒素为指标,用HPLC法测定“江边一碗水”中鬼臼毒素含量。色谱条件为 Agilent TC-C18色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相:甲醇-磷酸二氢钾水溶液0.l moL·L-1(45:55);柱温:30℃;流速:1 mL·min-1;检测波长:290 nm。指纹图谱研究,通过HPLC测定各单体化合物的保留时间,并对照“江边一碗水”生品指纹图谱,确定了6个其共有特征峰,分别为:槲皮素、苦鬼臼毒素葡萄糖苷、苦鬼臼毒素、鬼臼毒素、山奈酚、3-O-甲基槲皮素。  4、“江边一碗水”抗肿瘤的药效物质基础研究:对分离出的7个化合物的体外抗肿瘤活性进行了初步的研究,结果显示其中的6个化合物对人肝癌细胞HepG2均有不同程度的体外增殖抑制作用,其中以鬼臼毒素抑制作用最为显著。
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