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研究背景及目的：结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤。侵袭转移是结肠癌患者的主要死因,目前侵袭转移机制尚不明确。本课题组前期通过体内外增殖、侵袭转移相关实验发现miR-126是结肠癌的抑制性miRNA,且发现结肠癌中CXCR4是miR-126直接负调控的靶基因,通过对miR-126转染前后基因芯片筛选出的差异基因进行通路分析及后续试验研究,课题组证实RhoA信号通路参与结肠癌的演进,且miR-126可能具有负调控RhoA信号通路的作用。进一步通过人结肠癌组织芯片分析,在人结肠癌组织水平揭示miR-126通过负调控CXCR4/RhoA信号通路抑制结肠癌增殖及侵袭转移。本研究旨在前期工作的基础上,在细胞及裸鼠移植瘤水平进一步揭示结肠癌中miR-126对CXCR4/RhoA信号通路的调控作用；并进一步在结肠癌细胞水平揭示CXCR4是否为miR-126调控RhoA信号通路的关键节点。方法：1.Western Blot检测稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)和对照组(HCT116/miR-NC)以及稳定沉默miR-126结肠癌细胞系SW480(SW480/anti-miR-126)和对照组(SW480/anti-miR-NC)中CXCR4. RhoA及其下游靶分子ROCK. PI3K、PAK和PKN的表达情况；2.免疫组化技术检测裸鼠移植瘤模型中瘤体组织及转移病灶中CXCR4、RhoA及其下游靶分子ROCK、 PI3K、PAK和PKN的表达情况；3.构建CXCR4过表达载体,在稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)中瞬时过表达CXCR4,采用Real-time PCR技术及Western Blot技术检测CXCR4、RhoA及其下游靶分子ROCK、PI3K、PAK和PKN的表达情况。结果：1.Western Blot结果显示：在稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)中CXCR4、RhoA、RhoGEF、 ROCK、PI3K、PAK和PKN的表达较其对照组(HCT116/miR-NC)下调,ARhGAP5的表达较对照组上调；在稳定沉默miR-126结肠癌细胞系S W480(S W480/anti-miR-126)中CXCR4、RhoA、RhoGEF、 ROCK、PI3K,PAK和PKN的表达较其对照组(SW480/anti-miR-NC)上调,ARhGAP5的表达较对照组下调；2.裸鼠移植瘤模型免疫组化结果提示：(1)皮下原位瘤体组织免疫组化结果提示：与对照组相比,接种稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)的皮下移植瘤中CXCR4、RhoA、RhoGEF、ARhGAP5、PI3K、ROCK、 PAK及PKN的表达为下调趋势；与其对照组相比,接种稳定沉默miR-126结肠癌细胞系SW480(SW480/anti-miR-126)的皮下移植瘤中CXCR4、RhoA、RhoGEF、ARhGAP5、PI3K、ROCK、PAK及PKN的表达为上调趋势；(2)尾静脉肺转移瘤模型免疫组化结果提示：与其对照组相比,接种稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)的尾静脉移植瘤肺转移灶中CXCR4、RhoA、 RhoGEF、ARhGAP5、PI3K、ROCK、PAK及PKN的表达为下调趋势；与其对照组相比,CXCR4、RhoA、RhoGEF、ARhGAP5、PI3K、PAK和PKN在接种稳定沉默miR-126结肠癌细胞系SW480(SW480/anti-miR-126)的尾静脉移植瘤肺转移灶中的表达为上调趋势。3. CXCR4过表达载体pcDNA3.1-3FLAG-CXCR4构建成功,在稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)中瞬时过表达CXCR4后,Real-time PCR结果显示：CXCR4的表达在瞬时过表达组中的表达为对照组Vector/HCT116-miR-126组中的8641倍,差异有统计学意义(p<0.05),提示瞬时过表达CXCR4成功,RhoA、PI3K、ROCK在瞬时过表达组中的表达较对照组Vector/HCT116-miR-126组明显上调,p<0.05,差异有统计学意义；Western Blot结果显示：在稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116(HCT116/miR-126)中成功瞬时过表达CXCR4后,CXCR4、RhoA、 RhoGEFS、ARHGAP5、ROCK、PI3K、PAK及PKN在实验组CXCR4/HCT116-miR-126组中表达较对照组Vector/HCT116-miR-126组明显上调。结论：1.miR-126能通过靶向负调控CXCR4/RhoA信号通路抑制结肠癌增殖及侵袭转移；2.结肠癌中,CXCR4可能能逆转miR-126对RhoA信号通路的调控作用,CXCR4可能为miR-126调控RhoA信号通路的关键节点。