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多发性骨髓瘤是B细胞起源的、以骨髓克隆性浆细胞恶性增生和异常积累,并伴单克隆性免疫球蛋白增多为特征的一种衰竭性、不可治愈的恶性疾病。骨髓中恶性浆细胞的克隆性增殖和转移、血浆和/或尿中出现单克隆蛋白及器官功能障碍是本病的主要特点。该病目前尚不能被彻底治愈,中位生存期大约为3~4年,是导致患者死亡的严重疾病之一,因此,能够抑制甚至逆转多发性骨髓瘤进展是医学研究的重要目标。 巢蛋白(nestin)是最晚被识别的最大中间丝蛋白,其聚合、解聚不仅能直接影响细胞内部的信号传导,而且参与细胞周期中的如增殖、分化、迁移等重要过程。研究人员在对实体瘤的研究中发现:nestin在肿瘤的发病也起到了至关重要的作用,能够提示肿瘤的恶性程度,并可以作为肿瘤的诊断、预后的因素。令人意外的是,在多发性骨髓瘤患者体内成熟的浆CD138+CD38+细胞以及多种多发性骨髓瘤细胞系中,nestin亦有明显的表达趋势,但是nestin在多发性骨髓瘤中的作用并未得到系统的、科学的研究。目前,仅有研究者推测在多发性骨髓瘤中的浆细胞的髓外迁移过程中,nestin可能发挥了类似的其在实体瘤中的功能,或在多发性骨髓瘤的恶性浆细胞的异常蛋白的非正常增生过程中起到特定的作用。 如上所述,我们在这些已有研究的基础上,通过干预nestin的表达来初步探讨其对多发性骨髓瘤生物学行为的影响,以便为治疗多发性骨髓瘤探索新的标靶。 目的: 探讨nestin对多发性骨髓瘤细胞增殖、分化、侵袭及凋亡的生物学行为的影响,评价nestin的表达在多发性骨髓瘤中所起到的生物学作用,推断其对多发性骨髓瘤疾病发生、发展的生物学意义。 方法: 培养已被证实有nestin表达的多发性骨髓瘤细胞系U266,以nestin-siRNA转染的方式抑制其nestin表达。转染模型构建成功后,分别以MTS法,肿瘤细胞侵袭实验及流式细胞分析等方法检定并比较基因沉默前后多发性骨髓瘤细胞的增殖、侵袭、周期及凋亡情况。 结果: 在nestin基因沉默后,与空白对照组相比,多发性骨髓瘤细胞系细胞的增殖和侵袭水平有着明显的下降(94.82%±1.70%vs74.55%±2.19%,P<0.05;376.33±44.38vs105.67±18.15,P<0.05);凋亡率上升(11.46%±1.09%vs37.98%±4.28%,P<0.05)。细胞周期较多的停滞于G2/M期(21.06%±1.86%vs54.83%±7.56%,P<0.05),同时细胞凋亡的比率明显升高(11.65%±2.70%vs38.46%±2.35%,P<0.05)。 结论: 本研究结果显示nestin能够促进多发性骨髓瘤细胞的增殖和侵袭,并且通过阻滞细胞周期于G2/M期而抑制肿瘤细胞的凋亡,因而在多发性骨髓瘤的发病机制中起到重要作用。