论文部分内容阅读
背景分化型甲状腺癌(differentiated thyroid carcinoma, DTC)术后利用放射性碘去除残余甲状腺组织联合甲状腺激素抑制的综合治疗方法在多数患者身上取得了一定的效果,但有少部分患者的转移灶经多次13’碘治疗仍存在。这不仅使患者承受较多的辐射风险,而且有导致细胞失分化的可能。因此,如能找到提高131碘治疗DTC效果的方法将使此部分患者获益。Bcl2(B-cell Leukemia2)蛋白是最早被发现的凋亡调节蛋白。研究证实抑制Bcl2基因的高表达,可提高肿瘤对射线的敏感性。因此,利用RNA干扰(RNAinterference, RNAi)技术,通过抑制Bcl2基因的表达来促进肿瘤细胞的凋亡,是目前正在积极探索的一条新的肿瘤治疗途径。目的利用RNAi技术抑制Bcl2的表达,观察RNAi技术联合131碘辐射对提高甲状腺癌FTC-133细胞凋亡率的作用,为提高131碘治疗分化型甲状腺癌的疗效提供新的理论基础。方法1.合成3对siRNA-Bcl2。2. siRNA-Bcl2转染人甲状腺癌FTC-133细胞。3.荧光定量PCR (Real time-PCR)检测空白对照组、阴性对照组和转染siRNA-Bcl2的实验组(为保证好的抑制效果,实验组分为3组：实验组1、实验组2、实验组3)的Bcl2mRNA表达情况,并选择抑制效果好的实验组进行下一步实验。4. Western blot检测空白对照组、阴性对照组和实验组中Bcl2蛋白的表达情况。5.131碘辐射不同组FTC-133细胞。6. Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒检测空白对照组、阴性对照组和实验组FTC-133细胞凋亡率。结果：1. Real time-PCR检测：①空白对照组和阴性对照组Bcl2mRNA表达无统计学差异(p=0.8089)；②3个实验组Bcl2mRNA表达均减低,以转染siRNA2-Bcl2组(实验组2)抑制效果最明显；③实验组2和空白对照组Bcl2mRNA表达差异有统计学意义(p<0.0001),实验组2的Bcl2mRNA表达量约是空白对照组的0.17倍。2. Western blot检测：①空白对照组和阴性对照组Bcl2蛋白表达无统计学差异(p=0.3450)；②实验组2和空白对照组Bcl2蛋白表达量差异有统计学意义(p<0.0001),实验组2的Bcl2蛋白表达量约是空白对照组的0.37倍。3.流式细胞术检测：①131碘照射前：空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率无统计学差异(p=0.3333)；实验组2和空白对照组细胞凋亡率差异有统计学意义(p=0.0004)；②131碘照射后：空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率无统计学差异(p=0.8707)；实验组2和空白对照组细胞凋亡率差异有统计学意义(p<0.0001)。结论：siRNA-Bcl2转染人甲状腺癌FTC-133细胞可抑制Bcl2mRNA和蛋白的表达,联合131碘辐射能够增加人甲状腺癌FTC-133细胞的凋亡率,提高131碘对FTC-133细胞的杀伤率,有可能提高131碘对分化型甲状腺癌的疗效。