MxA基因编码的MxA蛋白具有广谱的抗病毒活性,一个氨基酸的改变会引起其抗病毒活性的变化。蒙古马抗病能力很强,因此对它的MxA基因多态性进行分析和构建蒙古马MxA基因真核载体能为马属动物抗性基因的选择、MxA蛋白抗体的研制、制作MxA抗病毒蛋白药物、通过转基因技术培育抗病动物等奠定理论基础。本研究以地方优良品种蒙古马为研究对象,根据GenBank上已公布的马MxA基因序列设计引物,乌珠穆沁马、乌审马、巴尔虎马、锡泥河马等蒙古马不同类群血液中提取DNA,扩增出7个外显子基因片段,再用PCR-SSCP方法进行多态性分析,结果发现只有乌珠穆沁马MxA基因第三外显子存在多态性,MxA基因cDNA序列第429位点由胞嘧啶(C)突变为鸟嘌呤(G),引起了相应氨基酸的变化,即亮氨酸(Leu)变成酪氨酸(Tyr),其余均未发现多态性。再从蒙古马外周血单核细胞中提取RNA后,采用RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)方法,获得MxA cDNA。扩增基因目的片段,经琼脂糖凝胶电泳回收,与pGEM?-T Easy载体连接,转化大肠杆菌,筛选重组子后,将酶切下的目的基因MxA cDNA克隆到真核表达载体pCI-neo中,经PCR鉴定,证实插入载体PCI-neo中含有目的基因的核苷酸序列,真核表达重组质粒pCI-neo MxA cDNA成功构建。