【摘 要】
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目的1.构建间歇性缺氧动物模型并验证。2.观察慢性间歇性缺氧对小鼠眼表的影响,探讨角膜上皮紧密连接蛋白的变化情况。3.初步观察慢性间歇性缺氧对小鼠泪腺的影响。方法1.构建间歇性缺氧动物模型并验证1.1构建间歇性缺氧动物模型自制缺氧箱,在箱内放置氧浓度检测仪,实时记录箱内氧气浓度。通过时间控制器及气体流量计设定氮气、氧气和空气吹入的时间及流量,使得缺氧箱内的氧气浓度呈现周期性变化。1.2验证缺氧动物
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目的1.构建间歇性缺氧动物模型并验证。2.观察慢性间歇性缺氧对小鼠眼表的影响,探讨角膜上皮紧密连接蛋白的变化情况。3.初步观察慢性间歇性缺氧对小鼠泪腺的影响。方法1.构建间歇性缺氧动物模型并验证1.1构建间歇性缺氧动物模型自制缺氧箱,在箱内放置氧浓度检测仪,实时记录箱内氧气浓度。通过时间控制器及气体流量计设定氮气、氧气和空气吹入的时间及流量,使得缺氧箱内的氧气浓度呈现周期性变化。1.2验证缺氧动物模型的有效性为进一步验证缺氧箱内氧气浓度的周期性变化可以引起小鼠机体发生间歇性缺氧。使用对呼吸循环影响小的麻醉剂乌拉坦麻醉小鼠后,用血氧饱和度仪夹住小鼠尾部,送入缺氧箱,实时记录小鼠血氧饱和度。2.探讨慢性间歇性缺氧对小鼠角膜上皮紧密连接及泪腺的影响2.1构建慢性间歇性缺氧动物模型选取雄性6周龄BALB/c小鼠30只,随机分为慢性间歇性缺氧组（CIH组）和常氧对照组（Normoxia组）。每日将CIH组小鼠置于缺氧箱中经历缺氧/复氧循环。Normoxia组小鼠除通入气体为空气外,其余设备与实验组一致。每日实验8小时,持续4周。2.2实验结束后,分别对两组小鼠进行眼表指标的检测,包括角膜荧光素钠染色和泪液分泌试验。2.3所有小鼠在同时间段内进行取材。用苏木素伊红染色观察小鼠角膜上皮和泪腺的形态学变化。TUNEL试剂盒检测角膜上皮和泪腺的凋亡情况。Western Blot和Real-time PCR技术检测NOX4、Occludin、Claudin-1和ZO-1蛋白及m RNA在角膜上皮的表达水平,应用免疫组化观察NOX4在泪腺的表达情况。结果1.在每一缺氧/复氧循环中,箱内氧气浓度和小鼠血氧饱和度随时间呈现周期性变化,提示成功构建间歇性缺氧小鼠模型。2.与Normoxia组小鼠相比,CIH组小鼠角膜荧光素钠染色评分增加,泪液分泌水平降低。角膜上皮细胞TUNEL阳性细胞数量增多。Western Blot和Real-time PCR结果提示角膜上皮NOX4蛋白和m RNA表达升高,紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1和ZO-1的蛋白和mRNA表达降低。3.与Normoxia组小鼠相比,CIH组小鼠泪腺腺泡细胞缩小,泪腺细胞TUNEL阳性细胞数量明显增多,NOX4表达升高。结论慢性间歇性缺氧会引起小鼠角膜上皮损伤,泪液分泌降低。角膜上皮损伤可能与角膜上皮氧化应激水平升高,上皮细胞凋亡和紧密连接蛋白表达下调有关。泪液分泌降低可能的机制与泪腺腺泡细胞缩小,泪腺凋亡,氧化应激水平升高有关。
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