螺旋藻中藻蓝蛋白的提取与纯化

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螺旋藻是一种低等原核水生植物,属于蓝藻门,颤藻科。螺旋藻中含有丰富的营养成分和多种生物活性物质,被世界卫生组织(WHO)美誉为“人类21世纪的最佳保健品”。螺旋藻中最主要的藻胆蛋白是藻蓝蛋白,它是一种天然的色素蛋白,可以制成对人体无危害的食品着色剂和高级化妆品等的添加剂,同时藻蓝蛋白本身带有荧光,也可作为一种昂贵的生化试剂。其次,藻蓝蛋白还具有特殊的药用价值,如其可以制成光动力学治疗肿瘤中的一种非常有前景的光敏剂等。但是藻蓝蛋白因为其生产成本居高不下,难以得到实际的应用。本论文探讨两种不同的纯化方法对藻蓝蛋白纯化的效果,以筛选出较适合藻蓝蛋白的纯化方法。本论文首先对螺旋藻中藻蓝蛋白提取条件进行优化,研究结果显示,固液比、超声时间、浸提时间和提取次数等都会对藻蓝蛋白的提取有影响。单因素考察得出提取藻蓝蛋白的最佳工艺条件为:固液比为1:25,超声时间为15 min,浸提时间为5 h,提取次数为3次,在此条件下可得到纯度为0.577的藻蓝蛋白。实验考察了双水相萃取藻蓝蛋白的影响因素,实验结果表明PEG平均分子量、TLL、VR和pH等对藻蓝蛋白纯化有影响,优化工艺结果显示,在PEG平均分子量2000,TLL=34.53%,VR=0.55,pH=6.5时,可将纯度为0.577的粗提液经双水相萃取可以得到纯度为1.47的藻蓝蛋白。最后,我们将最优提取条件下得到的粗藻蓝蛋白溶液先经过壳聚糖纯化,再硫酸铵盐析,并对壳聚糖纯化,硫酸铵盐析工艺条件进行了优化。将经壳聚糖和硫酸铵纯化后的藻蓝蛋白用羟基磷灰石层析和双水相纯化的优化条件分别纯化,均得到纯度为A620/A280=2.2左右的藻蓝蛋白溶液。对两种纯化方法从成本、收率、纯度和时间进行比较,得出双水相纯化藻蓝蛋白更为经济。
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