目的:利用双向电泳技术,获得兔骨折愈合不同时期(2w,4w,8w,12w)的骨痂蛋白和正常骨组织的蛋白质双向电泳图谱,动态的观察骨痂组织中蛋白质含量、种类与正常骨组织的差异,找出表达差异的蛋白质点,为后续进行质谱分析,鉴定出参与骨折愈合过程的特异性蛋白质奠定基础。方法:选择新西兰大白兔40只,体重2-2.2kg,随机分成4组,每组10只。建立兔桡骨的骨折模型,分别于2w、4w、8w、12w处死动物,截取骨痂组织及对侧正常骨组织。使用蛋白质裂解液,以正常骨组织为对照组,2w、4w、8w、12w的骨痂蛋白为实验组,分别提取各组骨组织的总蛋白,检测各组蛋白提取液的浓度,用SDS-PAGE凝胶电泳初步观察,双向凝胶电泳分离蛋白质和考马斯亮蓝染色后扫描获取高清晰的蛋白质图谱,再经计算机软件对比分析,得到表达差异的蛋白质点。结果:各实验组和对照组的双向凝胶电泳图谱分辨率高,重复性好。骨折愈合不同时期获得的蛋白质点个数:2周(843±29),4周(727±36),8周(785±30),12周(737±42),对照组蛋白点数为(710±25)。以对照组的双向电泳图谱为比较对象,实验组匹配蛋白点相对含量的比值大于2或者小于0.5则认为是差异蛋白质点,从而得出蛋白质差异点数目是: 22(2周),26(4周),24(8周),21(12周)。结论:本研究建立了分辨率高,且重复性好的兔骨折愈合蛋白质组学双向凝胶电泳图谱,发现了许多在骨折愈合过程中与对照组相比表达差异的蛋白质。为进一步分析鉴定骨折愈合相关的特异蛋白,探寻骨折愈合的机制奠定了基础。