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三疣梭子蟹是我国沿海地区重要的养殖品种，由病毒、细菌和真菌等引起的各种病害日趋严重，影响了三疣梭子蟹养殖业的健康发展。因此，深入开展三疣梭子蟹的免疫机制研究，将有助于提高机体抗病力，改良种质和培育抗病体系，为三疣梭子蟹健康养殖提供理论基础和实验依据。Toll样受体是一种重要的病原相关分子模式的识别受体，在脊椎动物以及无脊椎动物天然免疫中发挥着关键性的作用。 本研究通过同源克隆和RACE技术从三疣梭子蟹中获得2个Toll样受体基因的cDNA全长。结果显示，三疣梭子蟹 PtToll2 cDNA全长4320bp，ORF3591bp，编码1196个氨基酸；PtToll3 cDNA全长4459bp，ORF3690 b p，编码1229个氨基酸。PtToll2、PtToll3都具有To l l样受体的典型结构：包括一个起始的信号肽，富含亮氨酸的重复序列（LRRs），一个跨膜区，胞内区含有典型的TIR结构域。其中，PtToll2与果蝇DmToll8的相似性最高，达到44.0％；PtToll3与凡纳滨对虾LvToll3的相似性最高，达到76.2%，与果蝇 DmToll6的相似性次之，达到34.9%。两者都与黑腹果蝇亲缘关系较近。研究通过半定量及实时荧光定量PCR技术分析了PtToll2-3在各不同组织中的分布及表达水平。结果显示PtToll2在鳃中的表达量最高，在肠和肝胰腺中表达量较低，在心脏、肌肉和血淋巴中几乎不表达，PtToll2具有明显的组织分布差异性；PtToll3在各组织中都有分布，其中鳃中表达量最高，心脏和肠中表达量相对较低，血淋巴、肝胰腺和肌肉中表达量最低。另外，通过实时荧光定量 PCR方法检测三疣梭子蟹在溶藻弧菌、假丝酵母菌、WSSV的免疫刺激下，鳃组织中 PtToll2-3的表达量的变化。结果显示，溶藻弧菌可以引起 PtToll2和PtToll3的显著性下调；假丝酵母菌也可引起 PtToll2或PtToll3的显著性上调或下调；WSSV则引起了 PtToll2的显著性上调以及 P t To l l3延时性的显著性下调。由此推测 PtToll2、PtToll3可能参与三疣梭子蟹的先天免疫过程。本研究还通过构建重组质粒 pEGFP-N2-Toll2和pEGFP-N2-Toll3，并将之转染进 HEK293T细胞系中，成功在细胞中正确表达了梭子蟹Toll2-3蛋白。利用激光共聚焦扫描显微镜对其在细胞中定位，发现其皆在细胞质和细胞膜上均有表达。