中国南方副溶血性弧菌流行病学与基因分型研究

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副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种革兰氏阴性病原菌,该菌在水产养殖中广泛存在,近年来在我国南方地区的水产养殖动物中检出率也较高。多种水产动物如鱼类、虾类、贝类等均可被其感染,是水产动物的主要致病菌之一。此外,它也可引起人类产生腹痛、呕吐等临床症状,严重者会脱水甚至死亡,给水产养殖企业以及人类健康都造成了严重威胁。为了探究我国南方水产养殖中副溶血性弧菌的流行病学特征及遗传多样性特点,本研究对504份水产动物样品进行了副溶血性弧菌检测,并分离出98株副溶血性弧菌菌株,开展了药敏试验、毒力基因检测及基因分型等研究。本课题的开展有助于更加全面地掌握副溶血性弧菌的流行信息,为水产养殖企业对副溶血性弧菌疾病的综合防治提供数据支撑,并为企业有效防控水产相关疾病提供科学依据及理论参考。本研究的主要结果如下:1、本研究采集了2015年7月-2017年7月间中国南方11个省份的鱼、虾和贝类等水产动物样品进行副溶血性弧菌病原检测和流行病学分析,共采集到504份样品,其中包括鱼类样品224份、贝类样品112份和虾类样品168份,检测结果显示这3类样品副溶血性弧菌的阳性检出率分别为9.38%、30.36%、25.60%。季节性分类分析显示,该病原菌在夏季的阳性检出率(33.33%)高于冬季(9.76%)。该实验结果表明中国南方地区副溶血性弧菌在水产动物中的流行情况是比较严峻的,且夏季是副溶血性弧菌生长繁殖的最适季节。2、进一步从所采集样品中分离出的98株副溶血性弧菌菌株采用纸片扩散法测定其对15种抗生素的耐药情况。药敏试验的结果显示,98株分离株对氨苄西林的耐药率最高,达到了79.59%;其次是链霉素(68.37%);对头孢唑林、卡那霉素等也有耐药性。所有分离到的菌株中均没有发现对美罗培南、亚胺培南、头孢噻肟和头孢西丁产生耐药性。此外,多重耐药性分析结果显示,有68.38%的菌株对3种以上抗生素具有耐药性。该实验结果表明副溶血性弧菌菌株耐药性普遍,因此本结果可为水产养殖企业提供有效的用药参考,避免胡乱使用抗生素。3、通过主要毒力基因的检测,98株副溶血性弧菌分离株中,携带有tdh和trh基因的菌株分别占总菌株数的8.16%和12.24%,但没有发现同时携带这两个基因的分离株。三类水产动物样品中,鱼类分离到的菌株携带一种毒力基因(tdh或trh)所占的比例最高,占33.33%,因此,该实验结果提示水产养殖企业在鱼类养殖中更应该加强对该病原菌的预警。4、对98株副溶血性弧菌进行ERIC-PCR分型分析,能扩增出5-10条大小在100-6000 bp之间的条带。设置相似系数为0.67时,分离株可分为A、B、C、D、E和F六个簇,大部分分布在A和D簇。不同样本类型与ERIC-PCR聚类之间不存在显著关联性。MLST分型结果显示98株副溶血性弧菌菌株共检测出86个ST型,并将这些菌株分成了5个簇(I、II、III、IV和V)。上述两种基因分型方法均揭示了本研究的分离菌株间的遗传相关性与遗传多样性,对水产养殖企业科学防控疾病具有重要意义。
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