论文部分内容阅读
目的:用不同浓度的IP6作用于人结肠癌细胞系HT-29,观察IP6对癌细胞周期的影响并进行作用机制探讨,为研究IP6的抗癌机制提供理论基础。 方法:将不同浓度的IP6（0mM,1.8mM,3.3mM,5.0mM,8.0mM,13.0mM,）作用于HT-29细胞,分别进行如下研究:1、应用四甲基偶氮唑蓝实验（MTT法）分别观察IP6持续作用与间断作用对癌细胞增殖的影响;2、流式细胞仪检测不同浓度IP6作用的HT-29细胞的细胞周期变化;3、RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内cyclinD1、CDK4mRNA表达的影响;4、应用免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内细胞增殖相关基因PCNA、突变型p53蛋白、细胞周期抑制蛋白p21表达的影响 结果:1、不同浓度IP6持续作用对人结肠癌细胞株HT-29的生长抑制作用结果表明,与对照组相比,各浓度组OD值随IP6浓度的增加、作用时间的延长均显著降低（P<0.05）,显示IP6持续作用对结肠癌细胞株的生长具有抑制作用,且具有浓度依赖和时间依赖关系;不同浓度IP6间断作用对人结肠癌细胞系HT-29生长的增殖抑制作用的实验结果显示,在不同作用时间5种浓度IP6作用组的OD值普遍小于对照组（P<0.05）,但仅在每2天作用24小时的结果显示出各IP6作用组之间的浓度依赖关系。2、流式细胞仪检测不同浓度IP6作用对HT-29细胞周期的影响结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组在48小时、72小时两个时间点,随着IP6浓度的增高、作用时间的延长,G0-G1期细胞明显增加（P<0.01）,而S期、G2/M期细胞明显降低（P<0.01）,表现出浓度、时间依赖关系。3、RT-PCR实验结果显示,与对照组相比,各浓度组均使cyclinD1、CDK4mRNA表达不同程度降低。4、免疫细胞化学实验结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制突变型p53蛋白的表达（P<0.05）,上调p21蛋白的表达（P<0.05）。各IP6作用组均表现出HT-29细胞PCNA的表达降低（p<0.05）,作用强弱不同,其中3.3～5.0mM浓度组的OD值随时间延长而降低（p<0.05）。 结论:IP6对人结肠癌细胞系HT-29细胞周期有G1期阻滞作用,阻止细胞由G1-S期的转化,并具有浓度、时间依赖关系。其影响细胞周期的作用机制可能为:IP6降低突变型p53蛋白并促进野生型p53的表达,刺激细胞周期抑制蛋白p21的表达;p21竞争性结合cyclinD1/CDK4,抑制CDK4活性,使E2F活性降低,抑制DNA的合成,从而阻止细胞进入S期;p21还可与PCNA结合,形成p21-PCNA复合物,使细胞周期G1期阻滞,而发挥抑制癌细胞增殖作用。