B淋巴母细胞系(B-LCLs)体外可以无限增殖，为很多实验持续提供基因型和表型匹配的原材料，极大地促进了生物医学研究的发展。近年来，LCLs在人类全基因组分析中得到重要应用，成为遗传进化研究的重要资源。Epstein-BarrVirus(EBV)可感染外周血B细胞，并建立永生化B-LCLs。因此，有必要优化并建立一整套标准化的B-LCLs建系方法，更好地解决原代淋巴细胞工程化来源，推进B淋巴细胞的功能研究。　　本论文针对国内外通行的采用EBV感染外周血B淋巴细胞建立LCLs流程，通过优化建系方法参数、培养扩增条件、血液样品保存条件等，探索EBV永生化建立B-LCLs的优化条件和标准。　　本论文的主要结果如下:　　(1)利用饥饿法制备EBV病毒，Q-PCR法绝对定量病毒滴度。　　(2)本论文创造性研制出制备B-LCLs的红细胞裂解法，并与其它通行的三种　　方法:微量全血法，冻存全血法和Ficoll分离法进行了系统比较。发现红细胞裂解法实验操作简单，血液用量少，成功率和建成细胞系的细胞活力高; Ficoll分离法操作较为复杂，但是建系周期短，后期培养过程简单。　　(3)初步探索血液样品在建系前的保存条件及溶血对建系的影响。血液样品在建系前需要4℃低温保存和运输，高温不利于样品的保存;而且溶血现象观察及血常规分析表明溶血直接影响建系成功率。　　(4)优化建立B-LCLs的初始细胞数目、病毒滴度和血量。建立B-LCLs的初始细胞浓度在0.5×106 cells/ml以上、病毒滴度在2.6×106 copies/ml时，可以建系成功;且建系所需最少血量为0.5 ml，增大细胞密度，有利于提高建系成功率。　　(5)构建表达CD40L的NIH3T3细胞株，探索B-LCLs在饲养层细胞下的培养和扩增，及饲养层细胞在EBV转化过程中的应用。　　本论文通过对B-LCLs建立过程中的不同条件进行优化和标准化，为该方法在实际生产中的应用奠定基础，同时也为B-LCLs在遗传和功能研究中的应用提供分子资源。