【摘 要】
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目的:在痰瘀伏络理论的指导下,构建动脉粥样硬化（AS）动物模型,观察参红通络方对巨噬细胞极化的影响,进一步阐明该方抗AS的机制,为其临床应用提供实验依据。方法:实验一:将6周龄、雄性ApoE-/-小鼠,随机分成模型组、参红通络低、中、高剂量组,每组10只,选10只C57BL/6小鼠为空白对照组。适应性喂养1周,高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠,普通饲料喂养C57BL/6小鼠7周后,给予相应药物和等体
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目的:在痰瘀伏络理论的指导下,构建动脉粥样硬化（AS）动物模型,观察参红通络方对巨噬细胞极化的影响,进一步阐明该方抗AS的机制,为其临床应用提供实验依据。方法:实验一:将6周龄、雄性ApoE-/-小鼠,随机分成模型组、参红通络低、中、高剂量组,每组10只,选10只C57BL/6小鼠为空白对照组。适应性喂养1周,高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠,普通饲料喂养C57BL/6小鼠7周后,给予相应药物和等体积的生理盐水灌胃。观察小鼠一般状态及体重变化。在给药结束后,使用戊巴比妥麻醉取材,采用大体油红O染色法对小鼠主动脉整体进行染色,观察血管内斑块形成情况,并用Image Pro Plus软件统计斑块形成比。对小鼠主动脉窦病理切片进行采用H＆E染色,使用Image Pro Plus软件统计斑块坏死核心占比。实验二:应用ELISA检测炎症因子IL-10、IL-6、TNF-α的含量,免疫组化法检测M1型标记物CD86、M2型标记物CD206在小鼠主动脉根部病理组织切片中的表达情况;免疫荧光法和免疫印迹法检测巨噬细胞极化过程中相关蛋白i NOS、Arg-1的表达水平。结果:实验一:1.结果显示,各组小鼠的体重逐渐增加,组间比较没有统计学差异（P＞0.05）。2.大体油红O染色结果显示,空白对照组无明显动脉粥样斑块形成,模型组小鼠主动脉有明显斑块形成。各剂量参红通络方组小鼠主动脉整体与模型组对比,斑块面积有所减少,有统计学意义（P＜0.05）。组间比较表明中剂量组效果最佳,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.H＆E染色结果显示,空白对照组小鼠主动脉结构清晰,无斑块;而模型组小鼠主动脉可见明显斑块,坏死核心形成。与模型组比较,各剂量参红通络方组斑块有不同程度的改善,差异有统计学意义（P＜0.05）。实验二:1.ELISA结果示,模型组小鼠血清内IL-6、TNF-α含量相比空白对照组均明显增加,而IL-10含量减少,有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,各剂量参红通络方组小鼠血清内IL-6、TNF-α含量减少,IL-10含量增加,有统计学意义（P＜0.05）。2.免疫组化结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠主动脉组织CD86蛋白表达水平增加,CD206蛋白表达水平降低,有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,各剂量参红通络方组小鼠主动脉组织中CD86表达水平减少,CD206表达水平增加,有统计学意义（P＜0.05）。3.免疫荧光及WB结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠主动脉组织i NOS表达水平增加,Arg-1表达水平降低,有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,各剂量参红通络方组小鼠主动脉组织中i NOS蛋白表达水平均减少,Arg-1蛋白表达水平均增加,有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.参红通络方可以改善AS小鼠主动脉组织病变程度,减少坏死核心及粥样斑块的形成。2.参红通络方能够明显降低AS小鼠血清内IL-6、TNF-α的含量,增加IL-10的含量,表明该方能抑制炎症反应。3.参红通络方能够明显减少CD86、i NOS蛋白表达水平,增加CD206、Arg-1蛋白表达水平,说明该方可以通过减少M1型巨噬细胞,增加M2型巨噬细胞,调控巨噬细胞极化,改善巨噬细胞极化比例,增加斑块稳定性,从而发挥抗AS的作用。
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