膀胱癌血管生长因子的提纯及生物学活性研究

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膀胱肿瘤是一种血管依赖性恶性病变,新生血管的伴随生长在促进膀胱肿瘤的生长发展中起着十分重要的作用。近年来血管生长因子概念的提出,大大丰富和发展了肿瘤间质部分研究的理论和实践,同时也为膀胱肿瘤的研究提供了新的内容,开拓了在膀胱肿瘤防治上潜在的应用领域。 膀胱肿瘤血管生长因子的研究是近十年间才开展起来的,有关人膀胱癌组织中的血管生长因子尚未进行深入全面的研究。本研究在提取人膀胱癌组织蛋白质粗提物的基础上,对蛋白质粗提物分别进行了阳离子交换色谱、GF—HPLC及RP—KPLC的分离与纯化,在各步分离纯化中,应用鸡胚CAM新生血管形成和Balb/c 3T3细胞DNA合成作为生物活性的鉴定和筛选工具,纯化到成分比较单一的BCAF,并对BCAF作了部分理化性质分析及氨基酸成分组成测定。争取为临床建立一种早期、敏感、快速简便的诊断方法及为探索一条防治膀胱癌新的途径奠定基础,并为膀胱癌新生血管形成机理补充新的理论内容。 本文实验材料取自人膀胱癌手术切除标本,标本全部由病理检查证实,主要实验内容有: 1、从人膀胱癌组织中提取蛋白质及经阳离子变换色谱初步分离BCAF粗品。 2、通过GF—HPLC和RP—EPLC进一步分离及纯化BCAF。 3、采用鸡胚CAMCF为BCAF活性组分的筛选工具并检测不同纯度BCAF对CAM新生血管形成的促进作用。 4、采用Balb/c 3T3细胞DNA合成作为BCAF活性组分的另一个筛选工具并观察不同纯度的BCAF对细胞DNA合成的刺激作用。 5、对BCAF作了部分理化性质分析,包括BCAF的SDS—PAGE及分子量测定、BCAF成分中DNA和RNA含量测定。 6、对BCAF进行了氨基酸成分组成测定和分析。
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