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桔青霉素(Citrinin)是青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、红曲霉属(Monascus)中的丝状霉菌代谢产生的一种真菌毒素,在自然界中分布极其广泛。桔青霉素有致畸、致癌、致突变的潜在危害,而且还与某些地方性疾病的发生有密切联系,对人畜健康的危害十分严重。鉴于桔青霉素在食品、农产品中的普遍性和危害性,特别是近年来国内市场上红曲产品中桔青霉素的污染普遍性,大大影响了人们的身体健康和红曲产品的出口贸易,因此应继续加强红曲产品中桔青霉素检测方法的建立和相关限量标准的完善,以保证食品安全。此外,应当重视的是,传统药用植物与农产品、饲料相比,在生长、收获、运输和贮藏期间同样存在被产毒霉菌污染的可能性,因此很有必要建立一套中药中桔青霉素的检测方法,制订其合理的限量标准,以保证中药的安全有效。国内外对桔青霉素建立了多种检测分析方法,但这些分析方法只限于对食品、农产品以及饲料中毒素的分析,对中药中桔青霉素的分析,涉及还比较少。本文建立了红曲产品以及中药中桔青霉素的检测方法。主要研究内容和结论如下:
1、建立了红曲及其制品中桔青霉素的高效液相色谱检测方法及质谱确证方法,并对国内市场上红曲样品进行了污染状况调查。
红曲样品经甲醇-水(70:30,v／v)混合溶剂提取,通过桔青霉素免疫亲和柱(IAC)净化,采用HPLC-FLD测定,并对测定结果进行LC-MS／MS确证。该法检测限为0.8μg／kg,线形范围为0.1-1000 ng／mL,在25—200μg／kg添加水平下,回收率范围在73.4％-89.4％,相对标准偏差范围为2.1％-7.9％。对国内市场上59批红曲样品进行了分析测定,调查显示其中有29批样品检测为阳性,污染水平为16.62-5252.90μg／kg,该方法简单、准确、可靠,可用于红曲及其制品中桔青霉素的检测分析。
2、建立了中药材及其制品中桔青霉素的高效液相色谱检测方法,并对国内中药市场的中药样品进行了污染状况调查。
中药样品经甲醇-水(70:30,v／v)混合溶剂提取,通过桔青霉素免疫亲和柱(IAC)净化,采用HPLC-FLD测定。该法检测限为0.8μg／kg,在25-200μg／kg添加水平下,不同基质中药的回收率范围在79.2％-92.5％,相对标准偏差范围1.4％-4.8％。对国内市场上50批中药样品进行了分析测定,在该检测限以上没有样品含有桔青霉素。该方法简单、准确、可靠,可用于中药中桔青霉素的检测分析。
3、建立了中药中桔青霉素的高效液相色谱-串联质谱检测方法。
样品经甲醇-水(70:30,v／v)混合溶剂提取后,通过桔青霉素免疫亲和柱(IAC)净化,采用LC-MS／MS法测定中药中的桔青霉素。质谱采用电喷雾电离(ESI),多反应监测(MRM)方式分别监测离子对m／z251→m／z233(桔青霉素)和m／z472→m／z436(内标特非那定)。以桔青霉素和内标特非那定峰面积的比值对桔青霉素的浓度作线性回归,桔青霉素在0.1-50 ng／mL浓度范围内线性关系良好,日内和日间精密度以RSD表示均低于5.44％,方法的定量限为2.5μg／kg,平均回收率在81.2％-93.3％范围内。对28批包含中药材红曲米在内的中药样品进行了分析测定,有6批样品检出桔青霉素阳性,污染水平在8.55-357.5μg／kg。该方法快速、灵敏,结果准确,适用于复杂中药基质中桔青霉素的检测。