论文部分内容阅读
烟草黑胫病(Phytophthora parasitica)和烟草青枯病(Ralstonia solanacearum)是烟草上除烟草病毒病和烟草赤星病以外发生最普遍、危害最严重的侵染性病害。在烟草病害的多种防治方法中,农药防治对烟叶的品质和安全性影响较大,而生物防治对烟叶生产的可持续发展具有较好的应用前景。芽孢杆菌(Bacillus spp.)具有显著的生防潜力,是病害生防微生物的重要组成部分。荧光假单胞杆菌(Pseudomonasfluorescent)广泛存在于土壤中,其多数株系具有防治植物病害和促进植物生长的双重功效。本研究通过对实验室保存的,对黑胫病和青枯病有良好拮抗作用的芽孢杆菌和荧光假单胞杆菌进行人工诱变、筛选出对青枯病和黑胫病拥有更好效果的拮抗菌。1通过对实验室保存的黑胫病和青枯病拮抗菌进行筛选,初步得到两株对黑胫病和青枯病有较好温室防效的菌株:B-16-11和P-71-2,作为诱变实验的出发菌株。其中B-16-11对青枯病温室控病的相对防效为71.83%;P-71-2对黑胫病温室控病的相对防效为65.32%、对青枯病温室控病的相对防效为66.68%。2通过对紫外线、微波诱变致死率及正变率之间的比较,选择:30W紫外灯距离20cm处紫外线诱变时间为3min为宜,且菌株的遗传稳定性较高;微波诱变时间两株拮抗菌为3min;通过LiCl致死率与浓度之间比较,选择LiCl浓度:芽孢杆菌为0.6%、荧光假单胞杆菌为0.4%。3通过紫外线诱变,得到抑菌带宽度14mm以上或抑菌圈宽度28mm以上正向突变菌株8株,其中UV-P17的对黑胫病抑菌带宽度达到15.2mm、对青枯病抑菌圈直径达到28mm。通过温室控病测试,筛选出正向突变拮抗菌UV-P17,其对黑胫病的相对防效达到78.7%。4通过微波诱变,得到拮抗性能显著增强的正向突变菌株12株,其中Mw-P3、Mw-P44、Mw-P97、Mw-P73的对黑胫病抑菌带宽度达到15.2mm、15.8mm、15.4mm、15.8mm;Mw-B54、Mw-P99对青枯病抑菌圈直径达到29mm。通过温室控病测试,筛选出烟草黑胫病菌拮抗菌2株,Mw-P44、Mw-P73的相对防效为76.9%和71.6%。5通过紫外线+氯化锂诱变,得到拮抗性能显著增强的正向突变菌株13株,其中UVL-P9号菌株对青枯病菌的抑菌圈直径达到29mm,对黑胫病菌抑菌带宽度达到16mm。通过温室控病测试,未筛选出正向突变菌株。6通过微波+氯化锂诱变,得到拈抗性能显著增强的正向突变菌株16株,其中MwL-B108和MwL-B73菌株对青枯病菌的抑制效果最好,抑菌圈直径达到30mm;MwL-P26对青枯病菌和黑胫病菌的平板拮抗效果都有提高,对青枯病菌的抑菌圈直径达到29mm,对黑胫病菌抑菌带宽度达到15.3mm。通过温室控病测试,筛选出正向突变菌株5株,其中MwL-P77对黑胫病相对防效为84%、MwL-B24对青枯病相对防效达到82.2%、MwL-P26和MwL-P53对烟草青枯病和黑胫病的相对防效都在68%以上。7通过传代实验表明,通过微波和氯化锂复合诱变筛选出的拮抗菌在温室控病和遗传稳定性方面均有良好表现,MwL-P53在传代14次后温室平板拮抗对黑胫病菌抑菌带宽度为13.2mm、传代10次后青枯病菌的抑菌圈直径为28mm,拈抗性高于对照菌株。