【摘 要】
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目的:探讨短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)靶向沉默切除修复交叉互补基因组1(ERCC1)对不同浓度顺铂处理的肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响。方法:设计并合
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目的:探讨短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)靶向沉默切除修复交叉互补基因组1(ERCC1)对不同浓度顺铂处理的肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响。方法:设计并合成靶向人的ERCC1基因shRNA;采用脂质体lipofectamine 2000转染入A549/DDP细胞,通过Real-time PCR和Western Blot分别检测转染前后ERCC1 mRNA和蛋白表达;MTT法检测转染后各组细胞增殖抑制率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:成功构建ERCC1-shRNA并转入A549/DDP,ERCC1-shRNA有效抑制ERCC1mRNA和蛋白表达(P<0.05)。与阴性对照组和空白对照组比较,转染后细胞ERCC1增殖抑制率明显升高,IC50值明显下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增高(P<0.05)。结论:ERCC1-shRNA能有效沉默A549/DDP细胞中ERCC1基因的表达,细胞增殖显著受抑而凋亡明显增强。
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