苦荞醋饮联合沙棘醋饮对代谢相关脂肪性肝病斑马鱼幼鱼的保护作用及机制研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:michellehb1
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目的:探索苦荞醋饮联合沙棘醋饮对代谢相关脂肪性肝病斑马鱼幼鱼的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:第一部分:苦荞醋饮联合沙棘醋饮对高胆固醇饮食诱导斑马鱼幼鱼代谢相关脂肪性肝病的预防作用及机制研究将斑马鱼幼鱼随机分为对照组、高胆固醇饮食组、苦荞醋饮组、沙棘醋饮组、苦荞醋饮联合沙棘醋饮组,每组100条幼鱼,对照组给与标准普通饲料,高胆固醇饮食组给与高胆固醇饲料,其余组喂食高胆固醇饲料的同时给与相应的醋饮喂养。每天记录幼鱼死亡数,持续喂养醋饮1周后,计算各组斑马鱼幼鱼存活率,测量体重、体长;酶标仪法检测各组斑马鱼幼鱼TC、TG含量的变化;油红O染色观察斑马鱼幼鱼肝脏脂质积累情况;HE染色观察斑马鱼幼鱼肝脏组织病理学变化;酶标仪法检测各组斑马鱼幼鱼MDA水平;ROS染色荧光拍照观察斑马鱼幼鱼氧化应激情况;q RT-PCR法检测各组斑马鱼幼鱼HMGCRa、CYP51、CEBPA、Keap1、Nrf2、TNF-α、IL-1β的m RNA表达。第二部分:苦荞醋饮联合沙棘醋饮对代谢相关脂肪性肝病斑马鱼幼鱼的辅助治疗作用及机制研究先随机选取100条斑马鱼幼鱼作为对照组,其余斑马鱼幼鱼采用5%高胆固醇饮食诱导成代谢相关脂肪性肝病斑马鱼幼鱼模型,后随机分为模型组、苦荞醋饮组、沙棘醋饮组、苦荞醋饮联合沙棘醋饮组,每组100条幼鱼,对照组给与标准普通饲料,模型组继续给与高胆固醇饲料,其余组喂食高胆固醇饲料的同时给与相应的醋饮喂养。每天记录幼鱼死亡数,持续喂养醋饮3周后,计算各组斑马鱼幼鱼存活率,测量体重、体长;酶标仪法检测各组斑马鱼幼鱼TC、TG含量的变化;油红O染色观察斑马鱼幼鱼肝脏脂质积累情况;HE染色观察斑马鱼幼鱼肝脏组织病理学变化;酶标仪法检测各组斑马鱼幼鱼SOD、MDA水平;q RT-PCR法检测各组斑马鱼幼鱼SREBF1、PPARAB、CPT-1A、HMGCRa、CYP51、CYP7A1、Kea P-1、Nrf2、TNF-α、IL-6、IL-8、NF-κB、MMP9、TGFb的m RNA表达。结果:第一部分:苦荞醋饮联合沙棘醋饮对高胆固醇饮食诱导斑马鱼幼鱼代谢相关脂肪性肝病的预防作用及机制研究与对照组相比,高胆固醇饮食组体重增长显著(P<0.05),体长无显著性变化,喂食醋饮组斑马鱼幼鱼体重较高胆固醇饮食组显著降低(P<0.05),体长较高胆固醇饮食组无显著变化,苦荞醋饮联合沙棘醋饮组较苦荞醋饮组或沙棘醋饮组差异无统计学意义;油红O染色可见,对照组斑马鱼幼鱼肝脏油红O染色呈淡红色,边界模糊,高胆固醇饮食组斑马鱼幼鱼肝脏油红O染色呈红色,边界较清晰,肝细胞内脂滴增多,与高胆固醇饮食组比较,斑马鱼幼鱼肝脏油红O染色红染面积和数量在苦荞醋饮组未见明显减少,沙棘醋饮组和苦荞醋饮联合沙棘醋饮组略有减少,但差异不显著;HE染色所示,对照组斑马鱼幼鱼肝脏肝组织形态正常,排列紧密,高胆固醇饮食组斑马鱼幼鱼肝脏内可见细胞间间隙比较松散,出现大量空泡,脂肪变性占据肝脏面积的60%~70%以上,可诊断为发生了代谢相关脂肪性肝病,喂食醋饮组脂肪变性较高胆固醇饮食组未见明显好转。与对照组相比,高胆固醇饮食组TC、TG、MDA含量明显升高(P<0.05),喂食醋饮组TG含量较高胆固醇饮食组无显著变化,沙棘醋饮组TC含量较高胆固醇饮食组显著降低(P<0.05),苦荞醋饮联合沙棘醋饮组MDA较高胆固醇饮食组显著降低(P<0.05);ROS染色荧光拍照显示,对照组斑马鱼幼鱼肝脏处绿色荧光颜色较暗,高胆固醇饮食组较对照组绿色荧光强度与面积明显变大,不同喂食醋饮组肝脏处绿色荧光面积较高胆固醇饮食组较小,颜色也较暗,与对照组接近,进行活性氧荧光定量分析显示,苦荞醋饮组和苦荞醋饮联合沙棘醋饮组较高胆固醇饮食组显著降低(P<0.05);q RT-PCR结果显示,与对照组相比,高胆固醇饮食组斑马鱼幼鱼HMGCRa、CYP51、TNF-α、IL-1β的m RNA表达明显升高(P<0.05),与高胆固醇饮食组比较,喂食醋饮组斑马鱼幼鱼IL-1β、沙棘醋饮组TNF-α的m RNA表达明显降低(P<0.05),喂食醋饮组HMGCRa、CYP51m RNA表达差异无统计学意义。各组间CEBPA、Keap1、Nrf2比较差异无统计学意义。第二部分:苦荞醋饮联合沙棘醋饮对代谢相关脂肪性肝病斑马鱼幼鱼的辅助治疗作用及机制研究与对照组相比,Model组体重增长,体长无显著性变化,喂食沙棘醋饮组体重较Model组显著增长(P<0.05),喂食醋饮组斑马鱼幼鱼体长均较Model组无显著变化;油红O染色可见,与对照组相比,Model组斑马鱼幼鱼肝脏内呈大片红色,呈弥漫性红染脂滴,与Model组相比,喂食醋饮组斑马鱼幼鱼肝内脂滴数量和面积未见明显减少;HE染色可见,对照组斑马鱼幼鱼肝脏肝组织形态正常,排列紧密,Model组斑马鱼幼鱼肝脏内可见肝细胞明显肿胀,气球样变,大泡样脂滴形成,喂食醋饮组斑马鱼幼鱼脂肪变性、肝细胞肿胀和气球样变较Model组未见明显缓解;与对照组相比,Model组TG含量明显升高,SOD水平降低,TC、MDA含量显著升高(P<0.05),喂食醋饮组TG、SOD含量较Model组无显著变化,MDA水平显著降低(P<0.05),苦荞醋饮联合沙棘醋饮组较苦荞醋饮组或沙棘醋饮组无显著差异,苦荞醋饮组TC含量较Model组显著降低(P<0.05);q RT-PCR结果显示,与对照组相比,Model组斑马鱼幼鱼SREBF1、TNF-α、IL-6、IL-8的m RNA表达明显升高(P<0.05),HMGCRa、CYP51 m RNA表达明显降低(P<0.05),Nrf2、CPY7A1表达降低,MMP9升高,与Model组相比,喂食醋饮组斑马鱼幼鱼TNF-α、IL-6、IL-8的m RNA表达明显降低(P<0.05),CYP51显著升高,沙棘醋饮组和苦荞醋饮联合沙棘醋饮组CPY7A1显著升高(P<0.05),苦荞醋饮组SREBF1显著降低(P<0.05),苦荞醋饮联合沙棘醋饮组的PPARAB显著升高(P<0.05),醋饮组HMGCRa差异无统计学意义,沙棘醋饮组和苦荞醋饮联合沙棘醋饮组的Nrf2显著升高(P<0.05),沙棘醋饮组和苦荞醋饮联合沙棘醋饮组MMP9较Model组显著降低(P<0.05)。各组间Keap1、NF-κB、CPT-1A、TGFb比较差异无统计学意义。结论:1.苦荞醋饮联合沙棘醋饮、苦荞醋饮、沙棘醋饮均可以对MAFLD斑马鱼幼鱼起到一定的保护作用,可以考虑作为改善MAFLD饮食护理的潜在健康食品。2.醋饮发挥作用的机制可能是喂食醋饮可以抑制MAFLD斑马鱼幼鱼肝脏氧化应激、炎症和纤维化的疾病进展,进而降低MAFLD斑马鱼幼鱼的死亡率。
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