1984年,Fischer等人首次从猪肾中分离到一种具有脯氨酰顺反异构酶(Peptidyl-prolyl cis-tans isomerase, PPIase)活性、分子量为18 kDa的蛋白质。与此同时,另一个从牛胸腺细胞中分离得到,分子量也为18 kDa的蛋白被发现,该蛋白被称为亲环蛋白A (Cyclophilin A, CyPA),与免疫抑制剂亲免素A (Cyclosporin A, CsA)具有高度亲和力。两年后,Harding等人和Haendlert等人先后分析得到了小牛胸腺CyPA的氨基酸残基序列和人细胞系CyPA的cDNA序列。1989年,Fischer和Takahashi发现"PPIase"和CyPA事实上是同一个蛋白。随后的研究主要集中在CyPs的细胞生物化学的作用上。研究者发现除了具有调节CsA诱导的免疫抑制作用外,CyPs还涉及到各种不同的细胞内进程,如蛋白质的相互作用,细胞的分裂与增殖,蛋白质折叠,趋化因子CXCR4调节的信号级联放大作用,流感病毒的复制,HIV病毒的感染和衣壳蛋白的形成等等。1991年研究人员就得到了重组人T-淋巴细胞CyPA的结晶体,同年,其三维立体结构首次以2.5 A的精度被解析出来,之后各种底物或配体与CyPA的结合的立体结构通过X-Ray或NMR技术也陆续得到解析。解析晶体结构得到的结果表明CyPA是一个具有165个氨基酸残基的单链单结构域的蛋白质,由8个反向平行β折叠和2个位于桶的顶部和底部的α-螺旋组成。近年来,随着蛋白质折叠领域的研究越来越热,单结构域CyPA到底只是一个有PPIase活性的酶还是具有分子伴侣功能这样一个一直以来备受争议的议题重新受到人们的关注。1992年,Freskgard等人在研究猪肾中提取的CyPA对碳酸酐酶折叠过程后,发现CyPA不仅具有PPIase活性,而且具有能抑制碳酸酐酶折叠过程中产生的聚沉,并能提高折叠后的产率的能力,因此提出CyPA还具有分子伴侣的功能。不久以后,Kern等人在重复了Freskgard的试验,并将其实验中折叠反应的时间从一小时延长至四小时,后来发现添加CyPA后,碳酸酐酶的折叠产率和自发折叠的产率基本一致,据此,他提出CyPA在此过程中仅仅起到酶的作用。虽然近年来WEN-BIN OU等人由于偶然的因素得到失活的猪肾CyPA,并且发现失活的CyPA同有PPIase活性的CyPA一样能有效的抑制肌酸激酶(CK)折叠过程中的聚沉,并提高折叠产量。Anutosh Chakraborty等人发现来源于Leishmania donovani的单结构域CyPA可以溶解同样来自于Leishmania donovani的腺苷激酶的可溶性聚集并使其性恢复激酶活性。但是到目前为止,有关CyPA具有分子伴侣功能的证据还远远不够。在综合多种方法探讨CyPA活性位点文献的基础上选取了四个位点,利用基因定点突变技术对选定的位点进行替换突变,分别得到R55A、F60A、Q63A和H126A四个突变体,并表达和纯化得到了电泳均一纯度的突变体蛋白。PPIase活性检测发现四个突变体相较WT的活性残留率均小于0.2%,即突变体基本完全失活；利用紫外差谱和荧光光谱表征了突变体的结构,结果发现虽然所有的突变体在整体空间结构上相对野生型重组人亲环蛋白A (wild-type recombinant human Cyclophilin A, WT)较为疏松,但是R55A、F60A和H126A的Trp局部结构比WT变得更为致密,而Q63A的Trp临近区域相比WT却变得更为伸展,另外,ANS荧光显示Q63A比其它三个突变体具有更为伸展的空间结构；通过比较突变体与WT抑制精氨酸激酶(arginine kinase, AK,一种模式蛋白,含有12个脯氨酸残基,折叠过程中存在脯氨酰顺反异构现象)折叠过程中聚沉能力的大小,结果发现rhCyPA具有不依赖于PPIase的抑制聚沉的能力,有趣的是突变体Q63A抑制聚沉的能力高于WT,这或许与其结构中唯一的Trp邻近的空间结构的伸展程度或者与其整体结构更为疏松有关,这些实验结果显示rhCyPA具有分子伴侣的一些特征。利用双氧水氧化rhCyPA,得到完全失去PPIase活性的rhCyPA,分别考察不同浓度的天然态和氧化的CyPA(透析除去残留的双氧水)对AK折叠的影响,结果发现,天然态的CyPA抑制聚沉的能力与其浓度呈近似的化学计量关系,而这正是它区别于酶并且是分子伴侣的重要特征之一；氧化的CyPA不仅没有抑制聚沉,反而起到了加速的作用,这可能是由于氧化使rhCyPA大量的疏水表面外露导致与AK折叠过程中暴露在溶液中的疏水面相互作用,结果阻碍了AK向正确的方向折叠,最终加速了聚沉。另外,在纯化的过程中发现SDS-PAGE均一纯的rhCyPA在非变性胶上却显示三个蛋白带,并且凝胶层析有三个蛋白峰,且SDS-PAGE的行为一样,因此怀疑可能存在聚合体。进一步利用蛋白质印迹,电喷雾质谱,蛋白质交联,十六烷基三甲基溴化胺电泳(CTAB-PAGE)等技术验证了rhCyPA纯在单体、二聚体和三聚体三种形式。