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研究目的卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌,但死亡率高居妇科恶性肿瘤之首,由于卵巢癌发病隐匿,且缺乏特异性的分子生物学指标,使得早期诊断卵巢癌较为困难,大多数患者常以临床并发症就诊,此时患者己进入临床晚期,加之极易发生浸润转移,患者多失去最佳治疗机会。目前临床上针对卵巢癌的治疗主要以手术及化疗为主,但卵巢癌化疗过程中的毒副反应、耐药性的产生以及治疗后的高复发率严重影响了卵巢癌患者的临床预后,因此针对血管生成、肿瘤特异基因的靶向治疗等基因生物治疗逐渐成为卵巢癌新的临床治疗手段。含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX),也被称为WOX1或FOR基因,该基因最早由Bednarek等应用鸟枪基因测序技术发现,其作用与细胞的增殖、分化有密切联系,有研究显示,WWOX基因的作用机制主要是参与细胞通路间各产物信息传递及基因表达产物的调控。WWOX基因的基因组框架位于16号染色体长臂的23.3-24.1区,此区域内有FRA16D脆性位点,因此WWOX较易受外界因素影响而发生突变或缺失,加之WWOX包含9个外显子和密码子,因此其突变具有多样性。目前研究表明WWOX基因的缺失及突变与人类的多种恶性肿瘤的发生和发展有着密切联系,如卵巢癌、血液系统肿瘤、乳腺癌、肝癌及前列腺癌等。细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路作为促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路中的主要成员,与细胞增殖密切相关,有研究报道WWOX可与MEK形成复合产物从而调控细胞的凋亡。关于WWOX基因在卵巢癌中的具体作用机制尚未见于临床报道。本研究拟通过对ERK通路的干预,初步阐明WWOX基因表达与ERK通路间的相互关系,并为卵巢癌的治疗提供新的治疗靶点,因此具有重要的理论意义和临床实用价值。研究方法本实验以体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,细胞培养至对数生长期时按不同处理因素将卵巢癌SKOV3细胞分组：空白对照组、单纯PD98059组、单纯顺铂组、联合用药组。Cell Counting Kit-8(CCK-8)分别检测各处理组SKOV3细胞的增殖抑制率。实时荧光定量PCR检测各实验组细胞中WWOX基因和(ERK)基因表达水平。Western-bloting检测各组细胞中ERK活化状态磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达情况。普通光镜下观察各实验组细胞的生长状态及形态学改变。流式细胞术检测各实验组中SKOV3细胞凋亡的情况。实验所得数据应用SPSS17.0统计学软件分析,数据以x±s表示,与对照组比较采用t检验,各处理组之间采用单因素方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。结果联合用药组细胞增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.05)；单纯顺铂组及联合用药组WWOX mRNA表达量较空白对照组明显增加(P<0.05),单纯PD98059组WWOX表达量无明显改变(P>0.05); ERK mRNA在各组间的表达无明显变化(P>0.05)；单纯PD98059组、单纯顺铂组及联合用药组p-ERK1/2表达量均低于空白对照组,单纯顺铂组p-ERK1/2表达量高于单纯PD98059组及联合用药组,单纯PD98059组与联合用药组间p-ERK1/2表达量无明显差异。光镜下可观察到空白对照组及单纯PD98059组细胞生长状态良好,细胞铺满培养瓶,形态学无明显改变；单纯顺铂组及联合用药组细胞贴壁较少,细胞水肿明显,分布稀疏,联合用药组中部分细胞出现胞浆溶解样改变。流式细胞术检测结果示,与空白对照组相比,单纯PD98059组细胞早期及晚期细胞凋亡率间无明显差异,单纯顺铂组及联合用药组早期及晚期凋亡率明显增加,联合用药组晚期凋亡率明显高于其他各组。结论1. WWOX基因可与ERK/MEK通路中MEK形成复合物,通过改变ERK/MEK通路的激活状态,调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡。2.联合应用MEK特异性抑制剂PD98059及顺铂作用于卵巢癌SKOV3细胞,可通过增加WWOX基因表达,增加WWOX/MEK复合物的形成及特异性阻断ERK/MEK通路,对卵巢癌SKOV3细胞增殖产生明显的抑制作用,并促进细胞的凋亡