用于转基因玉米品系检测的PCR芯片的应用研究

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转基因技术在农业上的应用越来越多,转基因玉米的研究更是其重要的组成部分。近年来转基因玉米的研究及产业化给人类带来了巨大经济效益,但也产生了一些人身健康问题以及生态环境安全问题。为了确保标识管理制度的实施并且维护人们的知情权,增强对转基因玉米及其制品的检测及监管具有重要意义,因此探寻高灵敏度和高准确度的检测方法也成了研究热点。研究中比较了目前转基因玉米检测中出现的检测方法,不仅介绍了这些方法的原理及特点,还分析了这些方法存在的问题。在基因组DNA提取方法的研究中,为了获得高纯度的玉米基因组DNA,使用了6种优化了的DNA提取方法,通过比较最终选出了一种最为有效的玉米基因组DNA提取方法,对后续的实时荧光PCR检测十分有利。在实时荧光PCR研究中,共收集了13种转基因玉米(BT11、BT176、GA21、MON810、MON863、MON89034、NK603、MON88017、MIR604、MIR162、DP98140、BT10、T25)作为研究材料。通过查找NCBI数据库信息,找到了这些转基因玉米插入的外源基因以及玉米的内源基因ZEIN的基因序列。并利用Primer5.0和DNAMAN等生物学软件设计了特异性的引物及探针。通过实时荧光PCR实验,不仅确定了反应的条件,并验证了引物及探针的特异性。在芯片研究中,构建了一种能够对多个样品进行同时分析的转基因检测芯片,可用于玉米中的转基因成分的检测。研究中使用的PCR芯片是在常见的PCR反应板的基础上又结合了微流控技术,并且这种芯片的单个反应体积缩小至2.5?L,最多可一次进行384个反应。在实验中选择了7种转基因玉米品系(BT10、BT11、BT176、GA21、MON863、MON89034、T25)和1种非转基因玉米作为实验材料,对PCR芯片的扩增条件、特异性和灵敏度进行了测试。实验结果显示,构建的PCR检测芯片成功的实现了对多种转基因玉米的检测。芯片不仅具有极高的特异性,检出限更是低至0.1%。这种PCR芯片的结果可靠,可应用在玉米及其制品的转基因成分分析中。
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