论文部分内容阅读
目的心肌缺血再灌注损伤(MIR/I)是临床危重病诊疗中的热点问题,目前MIR/I的中枢调控机制尚不完全明确。本实验拟通过大鼠核团持续微量输注给药模型和心肌缺血再灌注损伤模型初步探究PVN或RVLM脑区输注神经递质γ-氨基丁酸(GABA)或L-谷氨酸(L-Glu)后神经元兴奋性变化对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,以神经示踪技术探究中枢PVN与RVLM投射关系,并初步明确PVNRVLM通路在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的调控作用及其机制。方法建立大鼠核团置管微量输注模型及心肌缺血再灌注损伤模型。本研究分为以下三个部分,第一部分:通过PVN脑区微量输注GABA或L-Glu引起神经元兴奋性变化探究该脑区在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。将右侧PVN脑区预埋管成功的清洁级健康雄性SD大鼠24只随机分为4组:假手术组(S组,n=6)、心肌缺血再灌注组(I/R组,n=6)、γ-氨基丁酸组(GABA组,n=6)及L-谷氨酸组(LGlu组,n=6)。采用结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。S组仅穿线不结扎,其余各组心肌缺血30 min、再灌注120 min。心肌缺血前10 min,S组和I/R组PVN微量输注生理盐水,GABA组和L-Glu组分别PVN微量输注GABA和L-Glu。记录心肌缺血前10 min(T0)、心肌缺血开始(T1)、缺血30 min(T2)和再灌注120 min(T3)时心电图(ECG)、平均动脉压(MAP)和心率(HR),并计算心率血压乘积(rate-pressure-product,RPP)。T3时留取大鼠动脉血浆,检测血浆心肌钙蛋白I(cTnI)水平;随后处死大鼠,取心肌组织测定缺血危险区体积(area at risk,AAR)心肌梗死体积(infarct size,IS),心肌损伤程度以IS/AAR表示。取脑区PVN组织采用Western blot法检测cfos蛋白的表达。第二部分:通过RVLM脑区微量输注GABA或L-Glu引起神经元兴奋性变化探究该脑区在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。取清洁级健康雄性SD大鼠通过立体定位方法进行RVLM脑区预埋置给药导管,并取术后健康存活且无置管后并发症的大鼠24只,实验分组及检测方法与第一部分相同,探究RVLM脑区神经元兴奋性在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及可能机制。第三部分:通过利用逆行嗜神经病毒(伪狂犬病毒,PRV)及逆行示踪剂(霍乱毒素B亚单位,CTb)等神经环路示踪工具分别立体定位注射PVN及RVLM,初步探究PVN及RVLM之间的神经纤维投射联系。结果在研究的第一部分,各组LV+RV体积及AAR体积比较差异无统计学意义(P>0.05),S组未见心肌梗死发生,其余3组心肌梗死明显。与S组比较,I/R组、GABA组和L-Glu组血浆cTnI浓度升高,PVN脑区c-fos蛋白表达上调(P<0.05),I/R组和GABA组T1-3时、L-Glu组T3时HR、MAP及RPP降低(P<0.05);与I/R组比较,GABA组IS体积、IS/AAR百分比、血浆cTnI浓度降低,PVN c-fos表达下调,T1,2时HR、MAP及RPP降低(P<0.05),L-Glu组IS体积、IS/AAR百分比、血浆cTnI浓度升高,PVN脑区c-fos蛋白表达上调,T1,2时HR、MAP及RPP升高(P<0.05)。在研究的第二部分,各组LV+RV体积及AAR体积比较差异无统计学意义(P>0.05),S组未见心肌梗死发生,其余3组心肌梗死明显。与S组比较,I/R组、GABA组和L-Glu组血浆cTnI浓度升高,PVN脑区c-fos蛋白表达上调(P<0.05),I/R组和GABA组T1-3时、L-Glu组T3时HR、MAP及RPP降低(P<0.05);与I/R组比较,GABA组IS体积、IS/AAR百分比、血浆cTnI浓度降低,PVN c-fos表达下调,T1,2时HR、MAP及RPP降低(P<0.05),L-Glu组IS体积、IS/AAR百分比、血浆cTnI浓度升高,PVN脑区c-fos蛋白表达上调,T1,2时HR、MAP及RPP升高(P<0.05)。在研究的第三部分,通过逆行跨多级病毒PRV及逆行示踪剂CTb的示踪,结果显示,当在右侧RVLM注射PRV或CTb时,在同侧PVN脑区可见散在逆行标记的神经元,当在右侧PVN注射逆行示踪剂CTb时,RVLM区未见逆行标记的神经元。结论通过PVN或RVLM脑区微量注射兴奋性或抑制性神经递质引起的神经元兴奋性变化参与了大鼠心肌缺血再灌注损伤的中枢神经调节机制:当神经元兴奋性降低时可减轻心肌缺血再灌注损伤,而神经元兴奋性升高则加重心肌损伤。存在PVN到RVLM的单向直接纤维投射。