背景类风湿关节炎（RA）是最常见的自身免疫性疾病之一，致残率高，常常影响患者生活质量，严重者甚至危及寿命。成纤维样滑膜细胞（FLS）在RA发病的各个环节均发挥着重要的作用，对细胞外基质和软骨的侵蚀性是它的重要特征，该特性与肿瘤细胞较相似。激酶在各类细胞迁移和侵袭中发挥重要作用，目前研究多集中在肿瘤和神经系统等疾病的领域中。脱氧胞苷激酶（DCK）是脱氧核苷酸生物合成补救途径中的关键酶，在自身免疫性疾病、病毒感染中，磷酸化后使核苷类似物的药物前体活化，在胸腺和骨髓中呈高表达。对于DCK与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RAFLS）的关系，目前尚无研究报导。目的和意义探索DCK基因对于RA FLS细胞迁移和侵袭功能的影响及其可能的发生机制，希望能够找到RA新的治疗靶点。方法建立RA成纤维样滑膜细胞（FLS）的体外培养体系，构建了针对DCK基因的shRNA慢病毒表达载体，对shRNA慢病毒颗粒进行包装纯化，然后用shRNA慢病毒感染RA FLS细胞，并在RA FLS细胞中用Real-time PCR和Western blot实验分别验证DCK基因的沉默效应。观察DCK shRNA基因沉默后的RA FLS细胞在划痕实验和transwell小室实验中迁移能力的改变；Matrigal侵袭实验中观察DCK基因沉默对RA FLS细胞侵袭功能的改变；采用MTS细胞活性实验来验证DCK shRNA慢病毒体系本身对RA FLS细胞活性有无影响；Real-time PCR实验检测DCK shRNA基因沉默后的RA FLS细胞的MMPs和TIMP的mRNA表达水平，液态蛋白芯片检测MMPs在DCK基因沉默后的RA FLS细胞培养上清液中的蛋白表达水平；F-actin骨架染色实验观察DCK shRNA基因沉默后RA FLS细胞的骨架纤维和粘着斑的变化情况。Western blot实验检测DCK shRNA基因沉默后RA FLS细胞中AKT、FAK、Src和ERK激酶的磷酸化和非磷酸化水平蛋白的表达及IKKa蛋白的表达变化情况；AKT特异性抑制剂MK2206和FAK特异性抑制剂PF-562271分别作用于RA FLS细胞，通过划痕实验来验证AKT和FAK是否影响RA FLS细胞的迁移功能；MK2206作用于RA FLS细胞，通过Transwell小室实验和Matrigel侵袭小室实验来验证AKT是否影响RAFLS细胞的迁移和侵袭功能。通过MTS实验来检测MK2206对RA FLS细胞的活性是否有影响。MK2206作用于RA FLS细胞，Western blot实验检测了FAK蛋白及IKKa蛋白的变化表达情况。结果成功构建具有沉默作用的DCK shRNA慢病毒表达载体；有效感染成纤维样滑膜细胞，沉默DCK基因。明确了DCK shRNA基因沉默具有特异性抑制RA FLS细胞迁移和侵袭能力，慢病毒体系本身对细胞活性无明显影响。DCK shRNA基因沉默可以抑制RA FLS细胞表达MMP-1和MMP-3的能力，同时使细胞中F-actin骨架发生重构，从而影响了RAFLS细胞的迁移侵袭能力。DCK shRNA基因沉默抑制RA FLS细胞迁移侵袭功能的下游通路蛋白是AKT和FAK蛋白激酶,而不是Src和ERK蛋白激酶；AKT和FAK所介导的信号通路可能是DCK影响RAFLS细胞的迁移和侵袭功能的机制之一；而DCK shRNA基因沉默使RAFLS细胞中F-actin骨架发生重构可能与DCK影响AKT从而影响FAK活化的改变有关；同时AKT可能通过IKKα影响NF-κB通路而影响MMP的表达，从而改变了RAFLS细胞的侵袭力。结论DCK shRNA基因沉默能够抑制RA FLS细胞迁移、侵袭能力，抑制细胞表达MMP-1和MMP-3的能力，使细胞中F-actin骨架发生重构。这其中的发生机制可能是与AKT通过影响FAK激酶活化通路及AKT通过IKKα影响NF-κB通路有关。这些结果提示DCK可能是RA治疗的新的一个靶点。