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目的：深低温停循环和深低温低流量方法在心脏外科得到广泛应用，但其暂时或永久的神经系统并发症却高达4％-25％(平均8％)，而且安全时限在45-60分钟，限制了该方法的临床应用。近年来大量研究显示这些迟发性的神经系统并发症与脑缺血诱发脑细胞的凋亡有关。本研究采用大鼠深低温颈总动脉阻断模型，应用流式细胞仪、电镜、原位缺口末端标记法(TUNEL)、免疫组化法(SABC)和RT-PCR技术分别检测深低温脑缺血对皮层神经细胞调亡的影响 方法：第一部分深低温停循环脑保护大鼠模型的建立：SD大鼠20只，麻醉后气管插管辅助呼吸，用冰块将大鼠的体温降至(21±1)℃，阻断双侧颈总动脉，记录体温、心率、血压、血氧饱和度和血气分析，60分钟后恢复颈总动脉血流，用Longa等的5级评分标准评定4小时和24小时后大鼠神经系统损伤情况。 第二部分深低温停循环对大鼠脑细胞凋亡影响的研究：SD大鼠30只，随机分为3组：深低温对照(DHC)组、常温对照(NTC)组和深低温停循环(DHCA)组，采用大鼠深低温双侧颈总动脉阻断后再灌注模型(深低温停循环脑保护大鼠模型)，在21℃时将双侧颈总动脉阻断60min再灌注24h后。(1)取大脑皮层细胞制成细胞悬液，流式细胞仪分析细胞凋亡改变，电镜观察细胞超微结构的变化；(2)用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞百分率；(3)免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。 第三部分深低温停循环对大鼠脑细胞凋亡相关基因表达的影响：南京医科大学硕士学位用Rl’- PcR技术检测Bd一2、Bax和casPase一3皮层脑细胞mRNA的表达，检测PCR产物的密度百分率。 用SPSSn.5统计分析实验结果。 结果:(l)实验组4只大鼠复苏失败死亡，16只大鼠成活，死亡率为20%，4小时后Longa等的5级评分标准评定动物神经系统现象为1一2级，24小时后无神经系统受损表现;对照组无大鼠死亡，4小时后Longa等级评分为。级。 (2)流式细胞仪检测脑缺血后皮层细胞凋亡增加，DHC组、NTC组和DHCA组脑皮层细胞凋亡率分别为(2 .20士0.43)%、(19.23士1 .01)%和(4 .72士1 .02)%(P<0.01)。 (2)原位缺口末端标记法(TUN旧L)和免疫组化法分别检测脑皮层组织:DHCA组Bcl一2表达水平为(65 .13士1 .84)%，较NTC组高(P<0.01)，而Bax蛋白表达、凋亡细胞百分率和Caspase一3分别为 (2.87士0.87)%、(4.35士 0.58)%和(3.3肚0.92)%，明显低于NTC组(P<0.01)，Bel一2/Bax比值DHCA组也明显比NTC组高(P<0.01)。 (3)NTC组、DHC组和DHCA组皮层脑细胞mRNA表达RT-PCR检测结果:Bel一2分别为:0.397士0.121、0.13妊0.085和0.693士0.089 (P<0.001):Bax分别为0.493士0.122、0.072士0.031和0.206士0.045 (p<0.001):Ca印ase一3分别为0.586士0.198、0.078士0.033和0.235士0.061 (P<0.001);Bel一2/Bax分别为3.3肚1.98、1.93士0.85和0.81士0.91(P<0 .01)。DHCA组Bel一之明显比其它组高，P<0.001，NTC组Bax和CasPase一3明显高，P<0.001。 结论:深低温能增强大脑细胞对缺氧的耐受性，促进Bcl一ZlnRNA和蛋白质的表达，抑制Caspase一3和Bax mRNA和蛋白质的表达，降南京医科大学硕士学位低缺血脑细胞的凋亡，是保护神经细胞的重要方法之一。