论文部分内容阅读
仔猪腹泻是一种以新生和幼龄仔猪为主的肠道传染性疾病,在养猪生产中普遍存在,严重影响了养猪业的经济效益。C型产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens type C,C.perfringens type C）是引起仔猪腹泻的主要病原菌之一。尽管通过提高饲养管理水平、接种疫苗和药物防治等措施在一定程度上减少了仔猪腹泻的发生,但由于仔猪的耐药性使得对腹泻防治的难度不断加大。因此,从长远来看,采用遗传学方法从遗传本质上提高仔猪对腹泻的抗性,是减少仔猪腹泻发生的重要手段。研究发现,miRNA在调控大肠杆菌和沙门氏菌感染引起仔猪腹泻的过程中发挥着重要作用,而且诸多研究已证实小肠在仔猪抵抗病原菌感染过程中有重要调控功能,但回肠中miRNA如何参与调控C型产气荚膜梭菌引起仔猪腹泻的功能尚不清楚。鉴于此,本研究选取30头7日龄健康仔猪（长×大）,随机选取5头仔猪作为对照组（IC）,其余25头仔猪进行C型产气荚膜梭菌口服攻毒试验,根据腹泻总评分筛选出易感组（IS）和耐受组（IR）仔猪,采用高通量测序技术对IC、IS和IR仔猪的回肠组织进行Small RNA测序,获取差异表达miRNA,预测差异表达miRNA靶基因,并进行GO功能和KEGG信号通路富集分析,筛选与仔猪C型产气荚膜梭菌性腹泻抗性相关的miRNA,在IPEC-J2细胞上研究其生物学功能。主要的研究结果:（1）共获得617个miRNA（319个已知miRNA和298个新miRNA）,对其表达量进行了显著性统计分析,共有53个差异表达miRNA。IS vs IC、IR vs IS和IR vs IC三个比较组分别有40个（20上调和20个下调）、10个（4上调和6个下调）和19个（9个上调和10个下调）差异表达miRNA。（2）GO功能富集分析发现,差异表达miRNA的靶基因主要富集在炎症反应的调控（Regulation of inflammatory response）、免疫系统过程（Immune system process）、白细胞介素-6产生的调控（Regulation of interleukin-6 production）、MAPK活性的激活参与先天免疫反应（Activation of MAPK activity involved in innate immune response）等一些与免疫、炎症反应相关的GO功能。（3）KEGG信号通路分析发现,这些靶基因主要富集在一些与感染性疾病、免疫相关的信号通路,如MAPK信号通路（MAPK signaling pathway）、ErbB信号通路（ErbB signaling pathway）、Jak-STAT信号通路（Jak-STAT signaling pathway）、Wnt信号通路（Wnt signaling pathway）、ECM受体的交互作用（ECM-receptor interaction）等。（4）筛选出了1个与C型产气荚膜梭菌性腹泻抗性相关的关键miRNA,即miR-500,RT-qPCR结果显示其靶基因HSPA2表达量IS和IR组显著高于IC组（P<0.05）,且IS组显著高于IR组（P<0.05）;靶基因TDP2表达量IR组显著高于IC组（P<0.05）,IS组极显著高于IC组（P<0.01）,且IS组显著高于IR组（P<0.05）。（5）成功构建了靶基因HSPA2和TDP2的野生型和突变型双荧光素酶载体(psi-CHECKTM-2-HSPA2-3’UTR WT、psi-CHECKTM-2-HSPA2-3’UTR Mut、psi-CHECKTM-2-TDP2-3’UTR WT、psi-CHECKTM-2-TDP2-3’UTR Mut)。双荧光素酶报告基因实验结果显示:靶基因HSPA2和TDP2的野生型载体+mimics组荧光素酶活性极显著低于野生型载体+mimics NC组（P<0.01）,突变型载体+mimics组与突变型载体+mimics NC荧光素酶活性差异不显著（P>0.05）;mimics+psi-CHECKTM-2组与mimics NC+psi-CHECKTM-2组荧光素酶活性差异不显著（P>0.05）。（6）RT-qPCR结果显发现,miR-500 mimics转染组HSPA2和TDP2基因的表达量极显著低于mimics NC转染组（P<0.01）,miR-500 inhibitor转染组HSPA2和TDP2基因的表达量极显著高于inhibitor NC转染组（P<0.01）。WB结果发现,靶基因TDP2的蛋白表达量在miR-500 mimics转染组极显著低于mimics NC（P<0.01）,miR-500 inhibitor转染组极显著高于inhibitor NC（P<0.01）;HSPA2蛋白表达量在miR-500 mimics转染组极显著低于mimics NC（P<0.01）,而miR-500 inhibitor转染组显著低于inhibitor NC（0.05
其他文献
垃圾渗滤液泄露、工业三废的排放、加油站地下储油罐和输油管道的泄露等造成了地下水污染严重。地下水污染具有隐蔽性和难以治理等特点,导致现有的一些修复技术成本高昂且修复效果不理想,所以,需要研究出一种经济有效的方法来控制污染源的扩散。地质聚合物作为一种新兴的环保型材料,具有流动性好、耐酸碱、高强低渗、价格低廉等优点,据此,本研究提出将地质聚合物材料注入地下,在污染源周围形成低渗透性垂直屏障,阻截污染物的
随着互联网数据爆炸式的发展,人们获取信息的服务从无到有,从有到更好的习惯发生巨大改变,同时面对互联网日益繁杂的物品,变得眼花缭乱,无从决策。尤其当面对数据负载时,用户不知如何去表达或者无法描述事物的时候,能否根据以往的交互行为记录推荐出相关的物品,推荐系统可以帮助用户快速获取所需信息。在现实中,由于用户与项目的交互数据往往是稀疏的,这给推荐算法带来了一定的困难。推荐系统的核心是根据用户的历史行为偏
本文主要试图解决以下问题:作为西方音乐史的研究,海顿所处时代究竟对其音乐创作产生何种影响?海顿的音乐在不同身份下产生了何种变化?作为音乐社会学的研究,海顿的社会身份经历了怎样的变化?这种变化在同时代作曲家中是否具有代表性?造成这种社会身份转变的最根本最深层次原因为何?本论文旨在研究海顿社会身份,全文围绕海顿两个身份:规定性社会身份及自致性社会身份展开,分别论述海顿双重社会身份在其音乐、职业中的体现
为解决卷烟工业企业设备管理精益化、信息化的技术经济管理难题,以江苏中烟工业有限责任公司为例,基于SAP系统的技术架构,建立一套完整的设备管理运作信息系统。该系统包括设
目前,氢能源是一种可再生、清洁能源。在众多能源转化技术中,电解水制氢作为一种高效率、无污染的产氢技术进而得到了广泛的研究。电解水制氢由析氢反应（HER）和析氧反应（OER）组成
2013年国务院常务会议上,国务院总理李克强对推进政府向社会力量购买公共服务进行了着重强调,预示着社会资本介入公共项目建设与服务市场将全面提速,扩大市场准入,对社会公共
目的:通过观察以补肾养阴法制方的“养精汤”改善肾阴亏虚型畸形精子症患者精子正常形态比例(%)、精子DNA碎片率(Sperm DNA fragmentation Index,DFI)、精子畸形指数(SDI)、
针对铁路客站应用传统建筑元素表现城市历史文化的现象,作者开始从建筑学角度思考推动两者结合的深层原因。虽然传统建筑元素转译与重构是建筑设计领域重要创作主题之一,伴随
现代工农业的不断发展,极大地促进了社会经济进步,但也导致大量污染物被排放到水环境中,造成水体污染。合成染料排放到水体中会影响动植物物生长,具有致畸和致癌风险,严重威