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研究背景：顺铂是非小细胞肺癌(NSCLC)最主要的化疗药物,但易产生耐药性,如何改变NSCLC耐药性及耐药逆转机制研究是当前的热点之一。我们前期研究表明,5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dc)可逆转NSCLC细胞的顺铂耐药性,但具体机制不明。最近研究显示,microRNA(miRNA)与肿瘤顺铂耐药相关,而5-Aza-dc可影响肿瘤细胞的]miRNA表达谱。因而我们推测：miRNA可能在5-Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转中发挥重要调控作用。本实验通过检测5-Aza-dc诱导前后的耐顺铂细胞株A549/DDP细胞中miRNA表达谱变化,及预测分析miRNA的靶基因,探讨]miRNA是否与5-Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转相关,为深入研究5-Aza-dc逆转顺铂耐药的miRNA调控机制提供基础。研究目的：探讨miRNA是否与5-Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转相关；初步筛选出调控5-Aza-dc逆转NSCLC细胞顺铂耐药过程的相关miRNA及靶基因。研究方法：以MTT法检测A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数及5-Aza-dc对A549/DDP细胞的耐药逆转作用。miRNA芯片技术检测5-Aza-dc诱导A549/DDP细胞后miRNA表达谱差异；quantitative real-time PCR(RT-qPCR)验证芯片结果。生物信息学方法预测miRNA的靶基因,并对靶基因进行GO分析及KEGG信号通路分析。结果：1.A549细胞和A549/DDP细胞对顺铂的IC50分别为6.79±1.58μM,39.39±2.86μM,耐药指数RI为5.80,该A549/DDP细胞鉴定为对顺铂耐药的肺癌细胞株。无毒剂量20μM5-Aza-dc诱导后的A549/DDP细胞对顺铂的IC50下降为17.21±3.13μM,耐药逆转指数为2.29,20μM5-Aza-dc诱导对A549/DDP细胞有明显的耐药逆转作用。2.总RNA质检显示样本纯度高,完整性好,符合miRNA芯片要求。miRNA芯片结果显示经5-Aza-dc诱导细胞后有131条差异表达的miRNA,其中43条]miRNA (27条上调,16条下调)表达差异倍数在2倍以上,两个样品芯片杂交信号值均在100以上。RT-qPCR结果显示与miRNA芯片结果趋势相似。3.生物信息学预测了miRNA如miR-320a, let-7b, miR-548j的靶基因,并分析靶基因的生物学功能及相关信号通路,从中初步筛选出可能介导5-Aza-dc逆转NSCLC细胞顺铂耐药的相关靶基因,如BCL2L1, SMAD2, E2F3等,并分析得到靶基因相关的MAPK信号通路,Wnt信号通路,JAK/STAT信号通路,PPAR信号通路,凋亡相关通路,药物代谢等信号通路,提示niRNA可能通过影响这些通路活性参与调控5-Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转。结论：miRNA可能与5-Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转相关,其机制可能是通过影响靶基因如BCL2L1, SMAD2, E2F3等的表达,进而调控NSCLC细胞的顺铂耐药逆转过程。图9幅,表12个,参考文献38篇