灰盖鬼伞生长周期短,在实验室条件下两周即可完成生活史,是研究担子菌生长发育过程的理想材料。在2003年灰盖鬼伞全基因组测序工作已经被完成,但是依然有很多预测基因的功能是未知的。然而通过同源重组进行敲除来研究基因功能的方法在灰盖鬼伞中是不可行的,因为同源重组的效率极低。为了克服同源重组的限制,研究者们已经建立了转录后基因沉默的方法,即RNA干扰。本实验组参照文献方法,构建了 RNA干扰体系,并将其成功运用于灰盖鬼伞基因功能的研究中。本实验构建了双链RNA表达载体,主要由双孢菇的gpdII启动子,构巢曲霉的TrpC终止子,丨oop序列,目标基因的正义链和互补的反义链组成。基于本实验组在前期构建的遗传转化体系,将双链RNA表达载体转入灰盖鬼伞中。通过荧光定量pcr检测了目标基因在干扰菌株中的表达量,发现目标基因被不同程度的沉默,沉默效率在20%-90%。可能是由于基因插入的拷贝数不同造成不同的转化子沉默效率不尽相同。灰盖鬼伞子实体生长发育过程要经历菌柄的伸长生长,伞盖的扩张和伞盖的自溶。本实验组在前期的研究工作中从自溶的伞盖中分离纯化到了三个葡聚糖酶,从菌柄中纯化到了一个胞外糖苷酶。经过一系列的实验我们推测这些酶可能参与子实体伞盖的自溶。为了从分子遗传学水平进一步研究这些基因的功能,我们将构建的RNA干扰体系运用于这四种葡聚糖酶的沉默,结果目标基因的表达分别被抑制,但是并没有明显的表型差异。荧光定量PCR检测到干扰菌株中部分同源基因表达量被上调,且分别上调了 8-20倍不等,我们认为没有明显的表型差异的原因是同源基因高表达回补了被干扰基因的功能,因此我们认为伞盖的自溶是多个葡聚糖水解酶共同作用的结果。