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目的 动脉粥样硬化(atheroclerosis,AS)是多种心脑血管疾病的病理基础,加强对其病因、发病机制及防治的研究,对于预防多种心脑血管疾病的发生,降低心脑血管疾病的病残率和死亡率,具有非常重要的意义。AS的发生原因还不清楚,近年来愈来愈多的证据证明AS是一个慢性炎症性疾病。本世纪初有人提出了AS发生的感染学说,目前主要侧重于研究肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae简称CPN)与AS的关系。血管内皮细胞的功能障碍和受损是AS重要的病理变化。本实验的研究目的主要集中在两个方面,一是探讨CPN对血管内皮细胞损伤机制及中药对这些环节的调节;二是探讨中药的直接抗CPN增殖的作用。 方法 1.建立体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)感染肺炎衣原体细胞模型。采用姬母萨染色、荧光染色和电子显微镜证明肺炎衣原体在细胞内的寄生。 将HUVEC置于25cm2的培养瓶内,以含体积分数为15%小牛血清、2万U/L链霉素和300μg/L万古霉素、50ng/L内皮细胞添加剂的RPIM-1640培养液,经37℃、体积分数为5%CO2培养箱内培养,培养后的内皮细胞以2×108/L的浓度接种于6孔培养板继续培养;孔底放入载玻片,待长成单层后加入肺炎衣原体,培养48h后,将载波片取出进行姬姆萨染色,姬姆萨染色方法参考鄂征法; 肺炎衣原体的异硫氰酸荧光素(FITC)荧光染色:取爬有细胞的盖玻片,PBS洗2次;甲醇固定5min后洗去,经自然干燥后加入30μL肺炎衣原体单克隆荧光抗体,③37℃湿盒孵育,30min;再用PBS冲洗2次;或用伊文思蓝复染5min,吸干涂片上的水,在荧光显微镜下观察肺炎衣原体在HUVEC内形成的包涵体、始体(EB)或网状体(RB)。 CPN的电子显微镜观察:用0.25%胰酶—EDTA消化感染CPN的细胞,在4℃用